Identification and validation of microRNAs as endogenous controls for quantitative polymerase chain reaction in plasma for stable coronary artery disease
作者:
Zhang, Yuejuan;Tang, Wenxian;Peng, Ling;Tang, Jinqiang
(唐金强);Yuan, Zhaokai
*(袁肇凯)
期刊:
Cardiology Journal,2016年23(6):694-703 ISSN:1897-5593
作者机构:
[Tang, Jinqiang; Zhang, Yuejuan] Hunan Univ Chinese Med, Coll Med, Dept Biochem & Mol Biol, Changsha, Hunan, Peoples R China.;[Tang, Wenxian] Hunan Normal Univ, Coll Life Sci, Changsha, Hunan, Peoples R China.;[Yuan, Zhaokai; Peng, Ling] Hunan Univ Chinese Med, Coll Tradit Chinese Med, Res Inst TCM Diag, Changsha, Hunan, Peoples R China.
通讯机构:
[Yuan, Zhaokai] H;Hunan Univ Chinese Med, Coll Tradit Chinese Med, Res Inst TCM Diag, Changsha, Hunan, Peoples R China.
关键词:
*circulating microRNA;*normalization;*reference genes;*reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR);*stable coronary artery disease
摘要:
Background: Circulating microRNAs (miRNAs) have been proved to serve as biomarkers for diagnosis and assessment of prognosis of coronary artery disease (CAD). Reverse transcription quantitative polymerase chain reaction (RT-qPCR) is a widely-used technique to estimate expression levels of circulating miRNAs. Selection of optimal endogenous control (EC) remains critical to obtain reliable qPCR data of miRNAs expression. However, reference controls for normalization of circulating miRNA in CAD are still lacking. The purpose of this study was to identify stably expressed miRNAs to normalize RT-qPCR data derived from plasma in stable CAD. Methods: We identified 10 stably expressed candidate ECs by combining miRNA microarray screening and literature screening. These 10 candidate ECs were estimated by RT-qPCR and the data were analyzed by NormFinder and BestKeeper algorithm. Results: Two most stable ECs were identified as EC candidates and they were subsequently validated in another larger cohort. The 2 candidates were also validated by normalizing the expression levels of miR-21. In general, they were superior to the commonly used reference gene RNU6 in quantification cycle (Cq) value, stability value and normalization effect. Conclusions: Our results demonstrated that miR-6090 and miR-4516 can be used as reference genes for plasma miRNA analysis in stable CAD. © 2016 Via Medica.
语种:
英文
展开
基于代谢组学的心血瘀阻证动态演变过程研究
作者:
简维雄;左和宁;刘韶;李杰;胡志希
(胡志希);...
期刊:
中国中西医结合杂志,2016年36(12):1496-1503 ISSN:1003-5370
作者机构:
湖南中医药大学中医诊断研究所, 湖南中医药大学国家重点学科中医诊断学, 湖南省重点实验室;[胡志希; 袁肇凯; 简维雄; 李杰; 孙贵香] 数字中医药协同创新中心, 长沙, 410208;湖南中医药大学第一附属医院检验科, 长沙, 410007;中南大学湘雅医院药学部, 长沙, 410008;[胡志希; 袁肇凯; 简维雄; 李杰; 孙贵香] 湖南中医药大学中医诊断研究所, 湖南中医药大学国家重点学科中医诊断学, 湖南省重点实验室
关键词:
心血瘀阻证;演变过程;代谢组学
摘要:
目的研究心血瘀阻证形成过程的代谢产物组学的变化。方法采用高脂饲料与冠状动脉左前降支结扎术结合的方法,制备大鼠心血瘀阻证形成的3个阶段。以血脂增高为血瘀证前期组,动脉粥样硬化形成为亚血瘀证期组,动脉粥样硬化基础之上结扎冠状动脉为心血瘀阻证组,每组8只。另取24只大鼠作为空白对照组,每个阶段8只。应用气相色谱-质谱联用仪(gas chromatography-mass spectrometer,GCMS),对不同组之间代谢产物含量的变化进行主成分分析(principal component analysis,PCA)及偏最小二乘法分析(partial least squares method,PLS)。结果 (1)在鉴定出的32中代谢产物中与心血瘀阻证形成过程密切相关依次是柠檬酸、胆固醇、肌醇、鸟氨酸、脯氨酸、异亮氨酸、硬脂酸、乳酸、尿素、亮氨酸、亚油酸、甘露糖。(2)3个阶段代谢标志物,血瘀证前期:硬脂酸、乳酸(正相关),甘露糖(负相关);亚血瘀证期:鸟氨酸、脯氨酸、肌醇(正相关),异亮氨酸(负相关);心血瘀阻证:亮氨酸、异亮氨酸、柠檬酸(正相关)、乳酸(负相关)。结论血瘀证前期高脂饮食引起体内脂质代谢紊乱,机体启动抗炎;亚血瘀证期持续高脂饮食所导致的尿素循环紊乱、肠道菌群失调、血管形态改变、肝脏功能障碍;心血瘀阻期急性心肌缺血后引起的糖代谢障碍。
语种:
中文
展开
心血瘀阻证研究思路探讨
期刊:
中国中西医结合杂志,2012年32(2):272-277 ISSN:1003-5370
通讯作者:
Jian, W.X.
作者机构:
[简维雄; 袁肇凯] 湖南中医药大学中医诊断研究所、国家重点学科中医诊断学湖南省重点学科中医诊断学
关键词:
心血瘀阻证;证候;病证结合;动物模型;系统生物学;转化医学;预警、预防、个体化医学
摘要:
证候是中医学的核心内容,也是现阶段研究的难点,本文通过病证结合、动物模型、系统生物学、医学模式等方面的论述展望下阶段心血瘀阻证研究思路。
语种:
中文
展开
大鼠心血瘀阻证心肌组织代谢组学的研究
作者:
简维雄;陈清华;黄献平
(黄献平);郑景辉;王丽萍;...
期刊:
中国中西医结合杂志,2012年32(4):515-520 ISSN:1003-5370
通讯作者:
Jian, W.X.
作者机构:
[黄献平; 袁肇凯; 简维雄; 郑景辉; 王丽萍] 湖南中医药大学中医诊断研究所;[胡志希; 陈清华; 孙贵香] 云南中医学院民族医学教研室
关键词:
代谢组学;心血瘀阻证;心肌组织
摘要:
目的寻找心血瘀阻证大鼠心肌组织代谢产物谱,以及养心通脉方干预后表型的变化,分析大鼠心血瘀阻证心肌组织的代谢途径。方法采用结扎大鼠冠状动脉左前降支复制急性心肌梗死(AMI)心血瘀阻证模型,同时采用养心通脉方干预模型,运用GC-MS检测模型组、养心通脉方组、假手术组和空白对照组4组大鼠心肌组织代谢产物,每组8只,通过对不同组之间代谢产物含量的变化进行主成分分析、偏最小二乘法分析。结果主成分分析:四组样本主成分得分分析,模型组、养心通脉方组与正常组、假手术组分聚于椭圆形散点图的3个区域。因子载荷图显示模型组甘氨酸、延胡索酸、苹果酸、谷氨酸、葡萄糖、磷酸、吡喃半乳糖、赖氨酸发生了改变。偏最小二乘法分析:PLS回归模型显示,模型组与养心通脉方组存在明显的线性关系,证明模型建立是合理的。药物干预与甘氨酸、苹果酸、谷氨酸、葡萄糖高度正相关,与尿素、琥珀酸高度相关,与赖氨酸负相关。按照VIP值依次排列各变量与药物干预的密切度依次是苹果酸、谷氨酸、甘氨酸、葡萄糖、延胡索酸、尿素、半乳糖、酪氨酸、乳酸、丙氨酸。差异性分析:明显变化的代谢产物差异性分析表明,甘氨酸等10种代谢产物在模型组中显著下降,与正常组比较差异有统计学意义(P<0.01)。药物干预后甘氨酸、延胡索酸、苹果酸、谷氨酸、半乳糖、葡萄糖、酪氨酸、尿素、乳酸、丙氨酸等含量增加与模型组比较差异有统计学意义(P<0.01)。其中苹果酸、谷氨酸、酪氨酸、尿素上升幅度较小,与正常组比较差异仍有统计学意义。赖氨酸经药物干预后均数显示有轻度下降,但与模型组比较差异无统计学意义。大鼠AMI心血瘀阻证与心肌组织代谢产物苹果酸、谷氨酸、甘氨酸、葡萄糖、延胡索酸、尿素、吡喃半乳糖、乳酸、丙氨酸、酪氨酸等含量的改变密切相关。结论心肌组织代谢产物谱显示AMI心血瘀阻证代谢途径与缺氧后的糖代谢紊乱密切相关,养心通脉方可以有效干预这一过程。
语种:
中文
展开
冠心病心血瘀阻证血浆代谢组学的检测分析
作者:
简维雄;袁肇凯
(袁肇凯);黄献平
(黄献平);陈清华;郑景辉;...
期刊:
中国中西医结合杂志,2010年30(6):579-584 ISSN:1003-5370
通讯作者:
Jian, W.X.
作者机构:
[黄献平; 袁肇凯; 简维雄; 陈清华; 郑景辉; 李勇华; 王丽萍] 湖南中医药大学中医诊断研究所;国家中医药管理局病理生理学实验室
关键词:
代谢组学;冠心病;心血瘀阻证;血浆
摘要:
目的 寻找冠心病(coronary heart disease,CHD)心血瘀阻证患者血浆代谢产物谱,分析CHD心血瘀阻证血浆层面的代谢途径.方法采用QP2010气相色谱一质谱联用仪(GC-MS)检测CHD心血瘀阻证组和CHD非心血瘀阻证组及健康对照组血浆代谢产物,对不同组之间代谢产物含量的变化主成分分析 (principal components analysis,PCA)、偏最小二乘法分析(partial lease squares,PLS).结果(1)主成分分析:显示3组样本主成分积分值,3组分聚于椭圆形散点图的3个区域,其中CHD心血瘀阻证组中乳酸、β-羟基丁酸、尿素、油酸、硬脂酸、花生四烯酸物质含量上调,而柠檬酸含量下调.(2)偏最小二乘法分析:显示健康组远离CHD心血瘀阻证组与CHD非心血瘀阻证组,CHD心血瘀阻证组与CHD非心血瘀阻证组位置比较靠近,可以判别他们同属一类;标准化偏最小二乘系数图显示CHD心血瘀阻证组与硬脂酸、花生四烯酸、尿素、乳酸、β一羟基丁酸呈正相关,与油酸、脯氨酸、甘氨酸、柠檬酸呈负相关.依据VIP值排列各变量与药物干预的密切程度,依次是花生四烯酸、硬脂酸、乳酸、尿素、柠檬酸、β一羟基丁酸、亚油酸、葡萄糖、丙氨酸、油酸和脯氨酸.(3)差异性分析:11种有明显变化的代谢产物差异性分析显示,花生四烯酸、硬脂酸、乳酸、尿素、β-羟基丁酸、油酸在冠心病中均有不同程度提高,以CHD心血瘀阻证中增高最为明显(均P<0.01).其中 CHD心血瘀阻证组的乳酸、β-羟基丁酸、亚油酸及葡萄糖值较CHD非心血瘀阻证增高显著(均P<0.01);而CHD心血瘀阻证组葡萄糖与健康组比较,差异有统计学意义(P<0.01).柠檬酸在冠心病中呈现不同程度的下降,其中CHD心血瘀阻证组与健康组比较差异有统计学意义(P<0.01).结论(1)花生四烯酸、硬脂酸、乳酸、尿素、柠檬酸、β-羟基丁酸、油酸、葡萄糖、丙氨酸为CHD心血瘀阻证患者的血浆代谢产物谱. (2)从血浆代谢产物谱分析,CHD心血瘀阻证与脂质代谢、糖代谢相关,同时也与缺氧、剧痛引起的应激相关
语种:
中文
展开
冠心病血瘀证血管内皮细胞功能的检测分析
期刊:
中国中西医结合杂志,2006年26(5):407-410 ISSN:1003-5370
通讯作者:
Yuan, Z.K.
作者机构:
[胡志希; 卢芳国; 黄献平; 袁肇凯; 毛以林; 李杰; 谭光波; 田松; 孙贵香] 湖南中医药大学;湖南中医药大学 长沙410007
关键词:
冠心病;血瘀证;血管内皮细胞功能;血管活性物质
摘要:
目的探讨血管内皮细胞功能在冠心痛(coronary heart disease,CHD)心血瘀阻证中的作用.方法对冠心病心血瘀阻证组112例、冠心病非心血瘀阻证组108例、非冠心病心血瘀阻证组110例和健康人对照组100名检测分析血管内皮细胞产生的一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、血管紧张素Ⅱ(AgⅡ)、可溶性细胞间黏附分子(sICAM-1)和可溶性血管细胞黏附分子(sVCAM-1)等血管活性物质.结果ET、AgⅡ、sICAM-1和sVCAM-1的异常程度均呈CHD心血瘀阻证组>CHD非血瘀证组>健康人对照组的趋势(P<0.05或P<0.01);而CHD心血瘀阻证组和非冠心病心血瘀阻证组之间差异无显著性(P>0.05).结论血管内皮细胞分泌的ET、AgⅡ、sICAM-1和sVCAM-1等血管活性物质,与CHD形成及病情变化密切相关,可能是CHD"血瘀"病理重要标志物.
语种:
中文
展开
冠心病血瘀证与血管紧张素转换酶基因多态性的相关性研究
期刊:
中国中西医结合杂志,2004年24(9):776-780 ISSN:1003-5370
通讯作者:
Mao, Y.L.
作者机构:
[胡志希; 卢芳国; 黄献平; 袁肇凯; 毛以林; 谭光波] 湖南中医学院中医诊断学国家重点学科;湖南中医学院中医诊断学国家重点学科 长沙410005
关键词:
血管紧张素转换酶I/D基因多态性;血管紧张素Ⅱ;内皮素;一氧化氮;冠心病
摘要:
目的探讨血管紧张素转换酶(angiotensin converting enzyme, ACE)基因插入/缺失(insertion/deletion, I/D)多态性与冠心病血瘀证的关系.方法用PCR法检测48例血瘀证和52例非血瘀证冠心病患者及54名健康人的ACE基因型,同时检测内皮素(endothelins, ET)、血管紧张素Ⅱ(angiotensin Ⅱ,AgⅡ)、一氧化氮(nitrogen monoxide, NO)值.结果冠心病血瘀证组ACE DD基因型及D等位基因频率高于非血瘀证组和健康对照组(P<0.01).ET/NO冠心病血瘀证组明显升高,与健康对照组比较差异有显著性(P<0.01).ET、AgⅡ冠心病血瘀证组明显高于非血瘀证组和健康对照组(P<0.05,P<0.01).ET/NO、AgⅡ各组DD型均高于II型和ID型,其中以冠心病血瘀证组DD型为最高,与其他两组比较AgⅡ差异有显著性(P<0.05,P<0.01),与健康对照组比较ET/NO差异有显著性(P<0.01).结论 DD型ACE基因可能为冠心病血瘀证发病的易感基因.
语种:
中文
展开