期刊论文

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中国药房

1001-0408

2009

20

33

2626-2628

湖南省教育厅省属高校科研项目（01C236） 湖南省卫生厅中医药科研基金课题（2006-062） 长沙市科技计划项目（k0901078-21）（致谢：感谢中南林业科技大学经济林育种与栽培国家林业局重点实验室大力支持完成本试验!）

本校为第一机构

目的:研究灰毡毛忍冬ISSR扩增的反应体系和扩增程序.方法:对影响灰毡毛忍冬ISSR扩增的反应体系的Mg~(2+)浓度、dNTP浓度、引物浓度、Taq酶浓度、模板DNA浓度进行优化,考察退火温度对ISSR扩增的影响.结果:优化的反应体系为25μL中,Mg~(2+)浓度为2.0 mmol·L~(-1),dNTP浓度为0.2 mmol·L~(-1),引物浓度为0.3μmol·L~(-1),Tao酶浓度为1.0 U.模板DNA浓度为20 ng.扩增程序为94℃预变性5 min,1个循环;94℃ 30 s,52℃ 45 s,72℃ 90 s,35个循环;72℃延伸5 min,可扩增出清晰稳定的条带.结论:该条件适合于灰毡毛忍冬的ISSR扩增.

OBJECTIVE: To study the reaction system and amplification process of ISSR (inter-simple sequence repeat) amplification of L.macranthoides. METHODS: The influencing factors of ISSR such as Mg~(2+) concentration, dNTP concentration, primer concentration, Taq polymerase concentration, template DNA concentration were optimized and the effect of the annealing temperature on the ISSR amplification was investigated. RESULTS: The optimized reaction system was obtained as follows: each 25μL reaction mixture contained 2.0 mmol·L~(-1) Mg~(2+),0.2 mmol·...