期刊论文

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湖南中医药大学学报

1674-070X

2008

28

2

37-39

10.3969/j.issn.1674-070X.2008.02.012

国家科技支撑项目（2006BAI06A11-06）.

本校为第一机构

目的 建立稳定性高、重复性好的适合玉竹ISSR-PCR扩增的反应体系.方法 以玉竹根茎为材料,采用改良的CTAB法提取玉竹基因组DNA,并利用单因素多水平试验,分别对模板DNA、引物、Mg2+、Taq酶、dNTP的浓度和退火温度进行考察.结果 玉竹的最佳反应体系为:在20μL的反应体系中,含1×buffer、15 ng模板DNA、0.4 μmol/L引物、2 mmol/L Mg2+、1.0 U Taq酶、200 μmol/L dNTP.此反应体系以52℃的退火温度扩增出来的玉竹电泳图谱清晰,重复性好.结论 本实验反应体系适宜于玉竹ISSR-PCR的扩增,为玉竹下一步分子生物学的研究打下基础.

Objective To establish a high stabilizing reaction system for Polygonatum odoratum ISSR-PCR. Methods The Polygonatum odoratum DNA was extraeted with improved CTAB technique and the template DNA concentration, primer concentration, Mg^2＋ concentration, dNTP concentration, Taq polymerase dosage and temperature were researched respectively. Result The best reaction system of Polygonatum odoratum was in the 20 μL system containing lxbuffer, 15 ng template DNA, 0.4 μmol/L primer, 2 mmol/L Mg^2＋, 1.0 U Taq polymerase, 200 μmol/L dNTP. Conclusion...