作者： 何兰;罗晶婧;周芳亮;范婧莹;史红健;...

期刊： 中华肿瘤杂志,2021年43(2):180-187 ISSN：0253-3766

通讯作者： Lan, H.;Yilan, J.

作者机构： [何兰] College of Integration of Traditional Chinese and Western Medicine, Hunan University of Traditional Chinese Medicine, Changsha 410208, China;[罗晶婧; 范婧莹; 周芳亮; 史红健] Hunan Provincial Key Laboratory for the Prevention and Treatment of Ophthalmology and Otolaryngology Diseases with Traditional Chinese Medicine, Changsha 410208, China;[何迎春] Hunan Provincial Ophthalmology and Otolaryngology Diseases Prevention and Treatment with Traditional Chinese Medicine and Visual Function Protection Engineering and Technological Research Center, Changsha 410208, China;[蒋益兰] Department of Oncology, Hunan Academy of Traditional Chinese Medicine Affiliated Hospital, Changsha 410006, China

通讯机构： [Lan, H.] C;[Yilan, J.] D;Department of Oncology, China;College of Integration of Traditional Chinese and Western Medicine, China

关键词： 鼻咽肿瘤;干细胞;增殖;侵袭;Ras信号通路

摘要： 目的:探讨鼻咽癌干细胞的生物学行为和Ras信号通路特征，以及CD44与Ras信号通路活化之间的调控关系。方法:采用无血清悬浮培养法获得鼻咽癌CNE2和5-8F细胞的干细胞CNE2-SC和5-8F-SC。采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)法检测细胞增殖，细胞平板克隆形成实验观察细胞克隆形成情况，Transwell细胞迁移实验检测细胞的迁移能力，细胞黏附实验观察细胞贴壁情况，Western blot法检测细胞中Ras信号通路相关蛋白的表达水平，采用RNA干扰技术明确CD44对Ras信号通路的调控作用。结果:接种后24、48和72 h，鼻咽癌干细胞CNE2-SC和5-8F-SC的增殖能力分别低于其来源鼻咽癌细胞(均 P<0.05)。细胞种植14 d后，CNE2-SC细胞的克隆形成率为(44.5±1.9)%，高于其来源细胞CNE2[(34.9±1.5)%， P<0.01]；5-8F-SC细胞的克隆形成率为(47.4±1.8)%，亦高于其来源细胞5-8F[(37.2±1.7)%， P<0.01]。CNE2-SC细胞的迁移细胞数为(87.6±7.8)个/视野，是CNE2细胞的3.97倍( P<0.01)。5-8F-SC细胞的迁移细胞数为(67.2±5.7)个/视野，是5-8F细胞的3.07倍( P<0.01)。接种后3 h，CNE2-SC和CNE2细胞的黏附贴壁率分别为(42.1±7.6)%和(8.9±2.0)%；接种后6 h，分别为(82.4±5.0)%和(12.1±2.2)%。CNE2-SC细胞的黏附贴壁率均高于CNE2细胞(均 P<0.01)。接种后3 h，5-8F-SC和5-8F细胞的黏附贴壁率分别为(53.6±6.1)%和(7.3±1.5)%；接种后6 h，分别为(90.7±3.6)%和(11.0±1.2)%。5-8F-SC细胞的黏附贴壁率均高于5-8F细胞(均 P<0.01)。与普通鼻咽癌细胞相比，鼻咽癌干细胞中CD44、Ras和N-钙黏蛋白(N-cadherin)的表达水平升高(均 P<0.01)，E-钙黏蛋白(E-cadherin)、10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物(PTEN)表达水平降低(均 P<0.01)，磷酸化丝裂原细胞外激酶1/2(p-MEK1/2)、磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶1/2(p-ERK1/2)磷酸化水平升高(均 P<0.01)。相关分析显示，CNE2细胞与CNE2-SC细胞中，5-8F细胞与5-8F-SC细胞中，CD44与Ras蛋白表达水平均呈高度正相关( r＝0.985， P＝0.002； r＝0.962， P＝0.038)。沉默CNE2-SC细胞中CD44的表达后，人表皮生长因子受体2(HER-2)和Ras的蛋白表达水平显著降低，p-ERK1/2、p-Akt和p-PKCδ磷酸化水平下降(均 P<0.01)。 结论:相对于来源鼻咽癌细胞，鼻咽癌干细胞增殖能力降低，但其克隆形成能力、迁移能力、黏附能力增强，可能与其CD44调控的Ras信号通路异常激活有关。

语种： 中文

作者： 周芳亮;胡晶;蔺婷;何兰;范婧莹;...

期刊： 中国药理学通报,2021年37(1):43-52 ISSN：1001-1978

作者机构： 湖南中医药大学 中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学 湘产大宗药材品质评价湖南省重点实验室,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学 医学院,湖南 长沙 410208;湖南中医药大学 湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心,湖南 长沙 410208;[王贤文; 范婧莹; 胡晶; 何兰; 蔺婷] Hunan Provincial Key Lab for the Prevention and Treatment of Ophthalmology and Otolaryngology Diseases with Traditional Chinese Medicine, Changsha, 410208, China, Hunan Provincial Engineering and Technological Research Center for Prevention and Treatment of Ophthalmology and Otolaryngology Diseases with Chinese Medicine, Protecting Visual Function, Changsha, 410208, China

关键词： 小檗碱;人参皂苷Rg3;联合作用;细胞凋亡;鼻咽癌;PI3K/Akt信号通路

摘要： 目的研究PI3K/Akt信号通路在小檗碱联合人参皂苷Rg3诱导鼻咽癌细胞凋亡中的作用。方法RTCA法检测小檗碱联合人参皂苷Rg3对鼻咽癌CNE2、6-10B细胞增殖的影响; Hoechst 33342染色法、荧光双染流式细胞仪检测药物对CNE2细胞凋亡的影响; Western blot法检测PI3K/ Akt信号通路关键蛋白及凋亡相关蛋白表达的变化。结果小檗碱联合人参皂苷Rg3可抑制鼻咽癌CNE2、6-10B细胞的增殖,诱导CNE2细胞的凋亡。与单独用药组相比,联合用药组细胞的PI3K/Akt信号通路关键蛋白PI3K p110α和p-Akt的表达明显下调(P < 0.05) 。加入PI3K/Akt信号通路的激活剂SC79后,小檗碱联合人参皂苷Rg3抑制CNE2细胞增殖和诱导细胞凋亡的效应降低,p-Akt、Survivin、PCNA及Bcl-2表达量增加,Bax的表达下降。结论小檗碱联合人参皂苷Rg3可通过PI3K/Akt信号通路发挥抑制鼻咽癌细胞增殖和诱导细胞凋亡的作用。

语种： 中文

作者： 田桂湘;彭坷平;薄涛;田道法;范婧莹;...

期刊： 中南大学学报(医学版),2020年45(7):759-765 ISSN：1672-7347

作者机构： [田桂湘] Department of Ultrasonography, Second Xiangya Hospital, Central South University, Changsha, 410011, China;[彭坷平; 田道法] Department of Otorhinolaryngology-Head and Neck Surgery, First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, 410007, China;[薄涛] Department of Neonatology, Second Xiangya Hospital, Central South University, Changsha, 410011, China;[范婧莹; 何迎春] Department of Otorhinolaryngology, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, 410208, China

关键词： 星形胶质细胞;常压高氧;全细胞膜片钳;细胞焦亡

摘要： 目的:观察高氧环境下星形胶质细胞焦亡过程中的电生理学变化特征及其与细胞形态变化的相关性。方法:星形胶质细胞暴露于氧浓度为90%的常压高氧环境中12～72 h,应用全细胞膜片钳技术分别于不同时间点检测各组细胞的电生理活动特性,并观察相应时间点的细胞形态学变化,然后收集同批次细胞,应用蛋白质印迹法检测其caspase-1,caspase-3,功能蛋白（gasdermin,GSDM）D和GSDME表达水平。结果:常压高氧暴露后12～72 h,全细胞膜片钳记录到内向电流较对照组明显降低（P<0.05）;外向电流在高氧暴露12 h时明显降低（P<0.05）,48 h时明显增加（P<0.05）,24与72 h较对照组稍低,但差异无统计学意义（P>0.05）。各时间点细胞形态学表现相应改变。蛋白质印迹法检测显示:caspase-1表达活性在高氧暴露24 h时明显增加（P<0.05）,72 h时明显减少（P<0.05）;GSDMD表达则在高氧暴露后12 h时增加（P<0.05）,24至72 h呈递减模式（P<0.05）;caspase-3表达在高氧暴露后12和24 h时均无明显变化（P>0.05）,但是在高氧暴露48 h时开始减少（P<0.05）;GSDME在高氧暴露24 h后逐渐增加（P<0.05）。结论:高氧环境下星形胶质细胞离子通道受损,维持细胞内外离子稳态的功能发生障碍,GSDME被激活,使受损细胞脱离凋亡通路并介导细胞焦亡途径。

语种： 中文

作者： 范婧莹;刘洁;刘晓丹;戴娜;何兰;...

期刊： 湖南中医药大学学报,2020年40(5):535-539 ISSN：1674-070X

作者机构： [何兰; 李丽鹏; 邹韵; 何迎春; 刘晓丹; 刘洁; 范婧莹] 湖南中医药大学;[王贤文; 戴娜] 中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室;湖南中医药大学第一附属医院

关键词： 益气解毒方;鼻咽癌;Wnt/β-catenin信号通路;细胞周期;细胞增殖

摘要： 目的 探讨益气解毒方对鼻咽癌CNE2细胞增殖及Wnt/β-catenin信号通路的影响.方法 将CNE2细胞用不同浓度(0.25、0.50、1.0 g/L)的益气解毒方水提物和阳性对照药(顺铂,4 mg/L)分别处理24、48、72 h,采用MTT法检测细胞增殖率,流式细胞术检测药物作用48 h后细胞周期分布情况;Western blot检测Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达情况.结果 MTT结果显示,益气解毒方对鼻咽癌CNE2细胞增殖具有明显抑制作用,且其抑制作用与作用时间、药物浓度呈正相关(P<0.05).细胞周期结果显示,处理48 h后,G0/G1期比例降低,S期和G2/M期比例增加(P<0.05,P<0.01).Western blot结果显示,水提物处理48 h后,Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达量明显下降(P<0.01).结论 益气解毒方可通过下调Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt5a/b、β-catenin及细胞周期蛋白CyclinD1的表达,阻滞细胞周期,抑制人鼻咽癌CNE2细胞的增殖.

语种： 中文

作者： 蔺婷;戴娜;罗晶婧;范婧莹;胡梅;...

期刊： 中华中医药杂志,2020年35(3):1484-1488 ISSN：1673-1727

作者机构： 湖南中医药大学中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室,长沙410208;湖南中医药大学湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心,长沙410208;湖南中医药大学中西医结合学院,长沙410208;湖南中医药大学研究生院,长沙410208;湖南中医药大学医学院,长沙410208

关键词： 益气解毒方;鼻咽癌;自噬;PI3K/AKT/mTOR信号通路

摘要： 目的:探讨益气解毒方对鼻咽癌细胞自噬的影响及其机制。方法:MT T检测益气解毒方对鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖的影响。透射电镜和MDC染色观察益气解毒方诱导CNE-2Z细胞的自噬效应。Western Blot法检测Beclin-1、LC3、PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达量。结果:益气解毒方抑制CNE-2Z细胞增殖(P<0.05, P<0.01)。与对照组比较,不同浓度益气解毒方组细胞内出现自噬体、MDC荧光强度增加、Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01),其中0.5mg/mL益气解毒方组增加最明显。与0.5mg/mL益气解毒方组比较,0.5mg/mL益气解毒方+3-MA组MDC荧光强度、Beclin-1和LC3Ⅱ蛋白降低(P<0.05)。与对照组比较,0.5mg/mL和1mg/mL益气解毒方组的PI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白表达均出现下调(P<0.05)。结论:益气解毒方可诱导鼻咽癌CNE- 2Z细胞自噬,其机制可能是通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路。

语种： 中文

作者： 何兰;周芳亮;范婧莹;罗晶婧;史红健;...

期刊： 中华中医药杂志,2020年35(3):1164-1169 ISSN：1673-1727

作者机构： 湖南中医药大学研究生院,长沙410208;湖南中医药大学中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室,长沙410208;湖南中医药大学湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心,长沙410208;湖南中医药大学医学院,长沙410208;[史红健; 何兰; 周芳亮; 廖端芳; 蒋益兰; 罗晶婧; 何迎春; 范婧莹] 湖南中医药大学

关键词： 鼻咽癌干细胞;增殖;克隆形成力;细胞生存蛋白;X连锁凋亡抑制蛋白;盐霉素;益气解毒方;药理学

摘要： 目的:观察益气解毒方联合盐霉素对鼻咽癌干细胞增殖的影响并初步探讨其分子机制。方法:益气解毒方、盐霉素(SAL)单独或联合干预鼻咽癌干细胞CNE2-SC、5-8F-SC后,细胞计数法、平板克隆形成试验观察其增殖和克隆形成能力,Western Blot法检测相关蛋白的表达水平。结果:益气解毒方和SAL均显著抑制鼻咽癌干细胞增殖且呈现出浓度依赖性。各药物组均能显著抑制鼻咽癌干细胞增殖和克隆形成(P<0.01),且益气解毒方+SAL抑制效应更强。益气解毒方组及益气解毒方+SAL组CNE2-SC和5-8F-SC的XIAP、Survivin、ALDH1/2表达水平显著降低(P<0.01)。SAL组CNE2-SC细胞ALDH1/2表达水平显著下降(P<0.01),但XIAP、Survivin表达水平显著升高(P<0.01);5-8F-SC细胞ALDH1/2、Survivin表达水平显著降低(P<0.01),但XIAP表达水平无明显变化。结论:益气解毒方联合盐霉素具有协同抑制鼻咽癌干细胞增殖的效应,其机制可能与其下调鼻咽癌干细胞中生存相关蛋白XIAP和Survivin以及干性相关蛋白ALDH1/2的表达相关。

语种： 中文

作者： 陈琳;吕炎;何文龙;胡晶;范婧莹;...

期刊： 中国癌症防治杂志,2020年12(01):39-43 ISSN：1674-5671

作者机构： 410208 长沙 湖南中医药大学医学院;湖南中医药大学研究生院;[范婧莹] 中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室;湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心;[陈琳; 胡晶; 何文龙; 何迎春; 吕炎] 湖南中医药大学

关键词： 鼻咽癌;CNE2细胞;汉黄芩素;增殖;凋亡

摘要： 目的 探讨汉黄芩素对鼻咽癌CNE2细胞增殖和凋亡的影响及其可能的作用机制.方法 采用不同浓度(2.5 μmol/L、5.0μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L)汉黄芩素作用鼻咽癌CNE2细胞,以溶剂为对照组.采用实时无标记细胞功能分析仪监测细胞增殖情况,双荧光法检测细胞凋亡情况,Western blot法检测PCNA、Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平.结果 不同浓度(2.5 μmol/L、5.0 μmol/L、10.0 μmol/L、20.0 μmol/L)汉黄芩素作用24 h后CNE2细胞增殖抑制率依次为20.3％、23.7％、33.4％、40.9％,IC50为42.41 μmol/L;36 h依次为18.0％、22.0％、36.1％、40.5％,IC50为34.46 μmol/L;48 h依次为7.4％、20.2％、35.0％、40.9％,IC50为22.81 μmol/L.与溶剂对照组比较,10.0 μmol/L、20.0 μmol/L汉黄芩素组细胞凋亡率均升高(t=23.710,P=O.001;t=43.934,P＜0.001).20.0 μmol/L汉黄芩素处理鼻咽癌CNE2细胞48 h后,与溶剂对照组比较,Bax蛋白表达水平上升(P＜0.05),Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达水平下降(P＜0.05).结论 汉黄芩素可抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖并诱导其凋亡,可能通过促进Bax蛋白表达并抑制Survivin、XIAP、Bcl-2蛋白表达发挥作用.

语种： 中文

作者： 刘洁;何兰;罗晶婧;范婧莹;史红健;...

作者机构： 湖南中医药大学研究生院;湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心;湖南中医药大学医学院

会议名称： 中华中医药学会耳鼻喉科分会第二十五次学术年会暨世界中联耳鼻喉口腔科专业委员会第十一次学术年会

会议时间： 2019-09-21

会议地点： 中国山东济南

关键词： 异欧前胡素;鼻咽癌;MAPK/ERK信号通路;凋亡

摘要： 目的:研究异欧前胡素诱导鼻咽癌CNE2细胞凋亡的效应,并探讨MAPK/ERK1/2信号通路在其诱导凋亡中的作用。方法:采用实时无标记细胞功能分析仪（RTCA）和MTT法检测细胞增殖情况;Annexin V-FITC/PI双荧光染色法和Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡;Western Blot法检测PCNA、XIAP、Survivin和Bcl-2的表达水平以及MAPK/ERK信号通路关键蛋白c-RAF、MEK、ERK1/2的磷酸化水平。结果:不同浓度异欧前胡素（10μM、20μM、30μM、40μM）均能显著抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖,48小时后,40μM浓度组抑制效果明显高于10μM、20μM浓度组;药物处理48小时,能显著诱导鼻咽癌细胞凋亡,出现细胞核固缩、碎裂;异欧前胡素处理48小时后,增殖相关蛋白PCNA、凋亡抑制蛋白XIAP、Survivin以及Bcl-2的表达水平降低,促凋亡蛋白Bax的表达水平上升,MAPK/ERK信号通路关键蛋白c-RAF、MEK、ERK1/2的磷酸化水平p-c-RAF、p-MEK、p-ERK1/2均降低;与单用异欧前胡素相比,盐酸异丙肾上腺素（ISO）激活MAPK/ERK信号通路后,异欧前胡素下调信号通路关键蛋白p-c-RAF、p-MEK、p-ERK1/2和抗凋亡蛋白Bcl-2的效应降低,上调促凋亡蛋白Bax的效应也降低,细胞凋亡率降低。结论:异欧前胡素可通过抑制MAPK/ERK1/2信号通路的活化,诱导鼻咽癌CNE2细胞凋亡。

语种： 中文

作者： 何兰,;刘洁,;范婧莹;罗晶婧,;史红健;...

作者机构： 湖南中医药大学研究生院;湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心;湖南中医药大学医学院

会议名称： 中华中医药学会耳鼻喉科分会第二十五次学术年会暨世界中联耳鼻喉口腔科专业委员会第十一次学术年会

会议时间： 2019-09-21

会议地点： 中国山东济南

会议论文集名称： 中华中医药学会耳鼻喉科分会第二十五次学术年会暨世界中联耳鼻喉口腔科专业委员会第十一次学术年会论文集

关键词： 鼻咽癌干细胞;增殖;克隆形成能力;细胞生存蛋白;X连锁凋亡抑制蛋白

摘要： 目的本文旨在观察益气解毒方联合盐霉素对鼻咽癌干细胞增殖的影响并初步探讨其分子机制。方法采用无血清悬浮法从鼻咽癌细胞CNE2和5-8F分别培养出鼻咽癌干细胞CNE2-SC、5-8F-SC后,用益气解毒方（0.5 mg/mL、1.0 mg/mL、2.0 mg/mL）、盐霉素（10μM、20μM、40μM）单独或联合干预,采用细胞计数法、平板克隆形成试验观察药物对鼻咽癌干细胞增殖和克隆形成能力的影响,采用Westernblot法检测药物对鼻咽癌干细胞生存蛋白Survivin及干性标记蛋白XIAP、ALDH1/2表达的影响。结果 1.益气解毒方和盐霉素单用均能显著抑制鼻咽癌干细胞增殖且呈现出浓度依赖性。2.联合效应的分析:析因设计中,采用1.0 mg/mL益气解毒方与盐霉素（针对CNE2使用40μM,5-8F使用30μM）进行联合用药效应分析,与溶剂对照组比较,各药物组均能显著抑制鼻咽癌干细胞增殖和克隆形成（P值均<0.01）,且益气解毒方联合盐霉素组抑制效应更强,两药联合交互作用具有统计学意义（P<0.01）。3.药物对蛋白表达的影响:与溶剂对照组比较,CNE2-SC和5-8F-SC细胞益气解毒方单用组及药物联用组XIAP、Survivin、ALDH1/2表达水平显著降低（P值均<0.01）,且药物联合应用组各蛋白表达水平交互作用均有统计学意义（P值均<0.01或者0.05）;CNE2-SC细胞盐霉素组ALDH1/2表达水平下降（P<0.01）,但XIAP、Survivin表达水平升高（P值均<0.01）;5-8F-SC细胞盐霉素组ALDH1/2、Survivin表达水平均降低（P值均<0.01）,但XIAP表达水平没有变化（P>0.05）。结论:益气解毒方联合盐霉素具有协同抑制鼻咽癌干细胞增殖的效应,该效应可能与其降低鼻咽癌干细胞中生存相关蛋白XIAP和Survivin以及干性相关蛋白ALDH1/2的表达相关。

语种： 中文

作者： 蔺婷;罗晶婧;周芳亮;范婧莹;戴娜;...

期刊： 中药新药与临床药理,2019年30(10):1149-1158 ISSN：1003-9783

作者机构： [何迎春] 中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室;[蔺婷] 湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心;湖南中医药大学中西医结合学院;湖南中医药大学医学院;湖南中医药大学研究生院

关键词： 益气解毒方;自噬;凋亡;鼻咽癌;CNE-2Z细胞

摘要： 目的研究益气解毒方(Qi-boosting toxin-resolving Formula,QBTRF)对人鼻咽癌CNE-2Z细胞自噬和凋亡的影响,探讨CNE-2Z细胞自噬和凋亡之间的关系。方法CCK-8法检测不同浓度益气解毒方干预鼻咽癌CNE-2Z细胞24 h和48 h后的细胞存活率,并计算48 h的IC_(50);采用Annexin V-FITC/PI流式细胞术Western Blot和透射电镜等方法检测QBTRF干预鼻咽癌CNE-2Z细胞后的自噬和凋亡情况。结果CCK-8法结果显示,QBTRF能显著抑制CNE-2Z细胞增殖(P<0.01),48 h的IC_(50)为0.5 mg·mL~(-1);AnnexinV-FITC/PI结果显示,与Control组比较,QBTRF干预不同时间后细胞凋亡率明显升高(P<0.01),与QBTRF组比较,3-MA(自噬抑制剂)+QBTRF组的细胞凋亡率显著下降(P<0.01)。MDC染色法结果显示,与Control组比较,0.5 mg· mL~(-1) QBTRF处理CNE-2Z细胞不同时间后荧光增强增加(P<0.05,P<0.01),干预24 h时,荧光强度最大(P<0.01)。Western Blot结果显示,与Control组比较,QBTRF干预CNE-2Z细胞不同时间后cleaved Caspase-3、 Bax、cleaved PARP、LC3-II、Beclin1蛋白表达上调(P<0.05,P<0.01),Bcl-2、PI3K、p-AKT和p-mTOR的蛋白表达量下降(P<0.01),AKT蛋白表达无变化(P > 0.05);与0.5 mg·mL~(-1) QBTRF组比较,3-MA+QBTRF组cleaved Caspase-3、cleaved PARP、Bax的蛋白表达量下降(P<0.01),Bcl-2、PI3K、p-AKT、和p-mTOR的蛋白表达量上调(P<0.05,P<0.01),AKT蛋白表达无变化(P > 0.05),Z-VAD-fmk(凋亡抑制剂)+QBTRF组的LC3-II和Beclin1蛋白表达量下调(P<0.05)。透射电镜结果显示,QBTRF干预CNE-2Z细胞不同时间后细胞内自噬体和凋亡小体出现不同程度增加,24 h自噬最为显著,48 h凋亡最为明显。结论QBTRF可抑制人鼻咽癌CNE-2Z细胞增殖并诱导细胞凋亡和自噬;QBTRF可能通过诱导自噬促进鼻咽癌细胞凋亡。

语种： 中文

作者： Meng, Pan;Zhu, Qing;Yang, Hui;Liu, Dan;Lin, Xiaoyuan;...

期刊： NEUROREPORT,2019年30(4):247-254 ISSN：0959-4965

通讯作者： Wang, Yuhong;Cai, X

作者机构： [Meng, Pan; Cai, Xiong; Cai, X; Wang, Yuhong; Zhu, Qing; Su, Wei; Wang, YH; Liu, Xiaodan; Fan, Jingying] Hunan Univ Chinese Med, Inst Innovat & Appl Res Chinese Med, 300 Xueshi Rd,Hanpu Sci & Educ Pk, Changsha 410208, Hunan, Peoples R China.;[Lin, Xiaoyuan; Yang, Hui; Liu, Dan; Liu, Lin; Liu, Jian] Hunan Univ Chinese Med, Affiliated Hosp 1, Changsha, Hunan, Peoples R China.;[Zhu, Qing] Cent S Univ, Xiangya Sch Med, Affiliated Canc Hosp, Changsha, Hunan, Peoples R China.

通讯机构： [Wang, YH; Cai, X ] H;Hunan Univ Chinese Med, Inst Innovat & Appl Res Chinese Med, 300 Xueshi Rd,Hanpu Sci & Educ Pk, Changsha 410208, Hunan, Peoples R China.

关键词： brain derived neurotrophic factor;corticosterone;fluoxetine;glucocorticoid receptor;leonurine;mifepristone;neurotrophic factor;neurotrophic factor 3;protein bcl 2;serum and glucocorticoid regulated kinase 1;unclassified drug;antidepressant agent;gallic acid;glucocorticoid receptor;immediate early protein;leonurine;protein serine threonine kinase;serum-glucocorticoid regulated kinase;animal cell;antidepressant activity;Article;cell death;cell maturation;cell viability;controlled study;drug mechanism;MTT assay;nerve cell differentiation;neurite outgrowth;neurotropism;nonhuman;PC12 cell line (pheochromocytoma);priority journal;rat;signal transduction;animal;cell survival;drug effect;metabolism;neurite outgrowth;PC12 cell line;signal transduction;Animals;Antidepressive Agents;Cell Survival;Gallic Acid;Immediate-Early Proteins;Neuronal Outgrowth;PC12 Cells;Protein-Serine-Threonine Kinases;Rats;Receptors, Glucocorticoid;Signal Transduction

摘要： Depression is a common psychiatric disorder that affects almost 10% of children and adolescents worldwide. Numerous synthetic chemical antidepressants used to treat depression have adverse side effects. Therefore, new therapeutic approaches for depression treatment are urgently needed. Leonurus cardiaca has recently been shown to be effective for the treatment of nervous system diseases such as depression, but its mechanism is not clear. In this study, we aimed to reveal the mechanism underlying leonurine’s antidepressant activity. Leonurine was used to treat corticosterone-induced PC12 cells to examine its effect on neurite outgrowth and neurotrophic factors after treatment with the inhibitor of glucocorticoid receptor (GR) and serum-inducible and glucocorticoid-inducible kinase 1 (SGK1). Methyl thiazolyl tetrazolium assays were used to evaluate the viability of cells. High content analysis was used to detect cell area, total neurite length, maximum neurite length, and expression of GR, SGK1, brain-derived neurotrophic factor (BDNF), neurotrophic factor-3 (NT-3), and B-cell lymphoma-2 (BCL-2). The results showed that leonurine increased cell viability in a concentration-dependent manner, with the maximal prosurvival effect at 60 μM. Leonurine increased cell area, total neurite length, and maximum neurite length of corticosterone-induced PC12 cells, increased the expression of GR, BDNF, NT-3, and BCL-2, and decreased the expression of SGK1. After treatment with GR inhibitor RU486, the expressions of GR, BDNF, NT-3, and BCL-2 were significantly decreased and SGK1 was increased. In contrast, treatment with GSK650394 had the opposite effect of RU486. Our data indicate that leonurine promotes neurite outgrowth and neurotrophic activity in cultured PC12 cells, and its potential mechanism may involve the GR/SGK1 signaling pathway.

语种： 英文

作者： 胡晶;刘洁;徐冰雁;范婧莹;罗晶婧;...

期刊： 湖南中医药大学学报,2019年39(08):943-947 ISSN：1674-070X

作者机构： 湖南中医药大学,湖南 长沙 410208;长沙医学院中医学院,湖南长沙 410219;湖南中医药大学,湖南 长沙,410208;中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室,湖南 长沙 410208;湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心,湖南 长沙 410208

关键词： 益气解毒方;鼻咽癌;细胞增殖

摘要： 目的 研究益气解毒方抑制鼻咽癌CNE2细胞增殖的效应.方法 采用实时无标记细胞功能分析技术(real-time unla-beled cell function analysis technique,RTCA)动态监测不同浓度(0.125、0.250、0.500、1.000 mg/mL的益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的影响;采用CCK-8法检测不同浓度益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖能力的影响;通过高通量细胞成像多功能检测系统Cytation5监测不同浓度益气解毒方水提物对鼻咽癌CNE2细胞增殖形态的影响;采用Western Blot技术检测不同浓度益气解毒方水提物对鼻咽癌CNE2细胞增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA表达的影响.结果 RTCA和CCK-8法实验结果显示,与空白对照组比较,益气解毒方水提物可以明显抑制鼻咽癌CNE2细胞的增殖,而且随着益气解毒方水提物的作用时间越长,其抑制效应越显著(P<0.05);Cytation5结果显示,与空白对照组比较,不同浓度益气解毒方水提物处理CNE2细胞后,细胞形态发生了明显变化,且浓度越高,作用时间越长,细胞膜皱缩,细胞核质浓缩、破碎更明显;Western Blot结果显示,与空白对照组比较,益气解毒方水提物能明显抑制CNE2细胞中增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA的表达(P<0.05).结论 益气解毒方水提物能明显抑制鼻咽癌细胞增殖,该效应与其抑制增殖相关蛋白Survivin、XIAP、PCNA的表达有关.

语种： 中文

作者： 蔺婷;周芳亮;罗晶婧;范婧莹;何迎春

期刊： 广西医学,2019年41(05):610-613 ISSN：0253-4304

作者机构： 湖南中医药大学中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室,长沙市 410208;湖南中医药大学湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心,长沙市 410208;湖南中医药大学中西医结合学院,长沙市 410208;湖南中医药大学医学院,长沙市,410208;湖南中医药大学中西医结合学院,长沙市,410208

关键词： 自噬;鼻咽癌;肿瘤;综述

摘要： 细胞自噬是一种程序化的细胞内降解机制,是细胞通过溶酶体降解其自身胞质成分的过程。已有研究证实自噬与多种恶性肿瘤关系密切,且自噬对肿瘤具有促进和抑制的双重作用。鼻咽癌是一种上皮源性恶性肿瘤,绝大多数属于低分化鳞状细胞癌,恶性程度高。研究表明,自噬在鼻咽癌中具有重要的作用。本文对自噬与肿瘤的关系及自噬与鼻咽癌的关系进行综述。

语种： 中文

作者： 范婧莹;娄余;张娜;彭瑶;朱莹

期刊： 湖南中医药大学学报,2019年39(08):937-942 ISSN：1674-070X

作者机构： 湖南中医药大学中西医结合学院,湖南 长沙,410208;湖南中医药大学研究生院,湖南 长沙,410208;湖南中医药大学第二附属医院,湖南 长沙,410005;湖南中医药大学第一附属医院,湖南 长沙,410007;[张娜; 彭瑶] 中医药大学第二附属医院

关键词： 三物白散;胃癌;细胞凋亡;迁移

摘要： 目的 探讨三物白散对Survivin-RNA基因沉默转染胃癌SGC-7901细胞凋亡、迁移的影响.方法 将实验分成6组:空白对照组、LV-RNAi组、Survivin-RNAi-LV组、空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组、Survivin-RNAi-LV+中药组;采用流式细胞仪检测各组细胞的凋亡,划痕实验检测各组细胞的迁移能力.结果 细胞凋亡率:Survivin-RNAi-LV组明显高于空白对照组和LV-RNAi组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组比较明显较高(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组高于Survivin-RNAi-LV组,差异具有统计学意义(P<0.05).胃癌细胞的24 h迁移率:Survivin-RNAi-LV组明显低于空白对照组和LV-RNAi组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与空白对照+中药组、LV-RNAi+中药组比较,其结果明显低于后两组(P<0.05);Survivin-RNAi-LV+中药组与Survivin-RNAi-LV组比较,细胞迁移率明显降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论 Survivin基因沉默转染,增强了三物白散诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡和抑制其迁移的作用.

语种： 中文

作者： Peng, Yao;Fan, Jing-Ying;Xiong, Jian;Lou, Yu;Zhu, Ying

期刊： PATHOBIOLOGY,2019年86(5-6):296-305 ISSN：1015-2008

通讯作者： Zhu, Y

作者机构： [Peng, Yao] Hunan Univ Tradit Chinese Med, Affiliated Hosp 2, Intens Care Unit, Changsha, Peoples R China.;[Fan, Jing-Ying] Hunan Univ Tradit Chinese Med, Coll Integrated Chinese & Western Med, Changsha, Peoples R China.;[Xiong, Jian; Lou, Yu] Hunan Univ Tradit Chinese Med, Grad Sch, Changsha, Peoples R China.;[Zhu, Ying; Zhu, Y] Hunan Univ Tradit Chinese Med, Affiliated Hosp 1, Dept Gastroenterol, 95 Shaoshan Middle Rd, Changsha 410000, Peoples R China.

通讯机构： [Zhu, Y ] H;Hunan Univ Tradit Chinese Med, Affiliated Hosp 1, Dept Gastroenterol, 95 Shaoshan Middle Rd, Changsha 410000, Peoples R China.

关键词： antineoplastic agent;caspase 3;caspase 7;microRNA 34a;platycodin D;protein Bax;protein bcl 2;saponin derivative;survivin;triterpenoid;unclassified drug;BIRC5 protein, human;microRNA;MIRN34 microRNA, human;platycodin D;saponin;survivin;triterpene;AGS cell line;animal experiment;animal model;animal tissue;antineoplastic activity;apoptosis;Article;cancer chemotherapy;cancer susceptibility;controlled study;down regulation;gene expression;HGC-27 cell line;human;human cell;in vitro study;in vivo study;MKN28 cell line;mouse;NCI-N87 cell line;nonhuman;priority journal;protein expression;protein targeting;SGC-7901 cell line;stomach cancer;tumor xenograft;animal;cell proliferation;drug effect;drug screening;gene expression regulation;genetic predisposition;genetics;nude mouse;stomach tumor;tumor cell line;Animals;Apoptosis;Cell Line, Tumor;Cell Proliferation;Gene Expression Regulation, Neoplastic;Genetic Predisposition to Disease;Humans;Mice;Mice, Nude;MicroRNAs;Saponins;Stomach Neoplasms;Survivin;Triterpenes;Xenograft Model Antitumor Assays

摘要： Introduction: Platycodin D (PD), a triterpenoid saponin isolated from Platycodon grandiflorum, has a well-known anti-Tumor effect in multiple human cancers, including gastric cancer (GC). miR-34a plays an important role in the progression of GC. However, the relationship between miR-34a and the susceptibility of GC cells to PD is still unclear. The aim of our research was to investigate the functions of miR-34a in mediating the susceptibility of GC to PD. Methods: qPCR was performed to detect the expression level of miR-34a and survivin in GC cells. The expression of survivin, Bcl-2, Bax, and cleaved caspase-3 was analyzed using Western blot. Cell viability was detected by MTT assay, and apoptosis was analyzed via Annexin V-FITC/PI staining followed by flow cy-Tometry. The colony formation and scratch-wound assays were applied to assess cell proliferation and migration. Caspase-3/7 activity was detected by a Caspase-Glo®3/7 detection kit. The relationship between miR-34a and survivin was determined by dual luciferase reporter gene assay. Finally, a GC xenograft mouse model was used to confirm our findings in vivo. Results: The expression of miR-34a decreased but survivin increased inversely in human GC cells. Survivin is a direct target of miR-34a and may be negatively regulated by miR-34a. PD could inhibit GC cell proliferation and induce apoptosis. Importantly, overexpression miR-34a or suppressing survivin was shown to enhance the susceptibility of GC to PD both in vitro and in vivo. Conclusions: miR-34a could modulate the susceptibility of GC to PD via targeting survivin, suggesting miR-34a overexpression may serve as a novel strategy to sensitize GC to anti-cancer drugs. © 2019 S. Karger AG, Basel.

语种： 英文

作者： 何兰;范婧莹;史红健;周芳亮;罗晶婧;...

期刊： 中国耳鼻咽喉头颈外科,2019年26(10):526-530 ISSN：1672-7002

作者机构： 湖南中医药大学研究生院, 湖南, 长沙, 410208;中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室, 中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室, 湖南, 长沙, 410208;湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心, 湖南省中医药防治眼耳鼻咽喉疾病与视功能保护工程技术研究中心, 湖南, 长沙, 410208;[何兰] 湖南中医药大学研究生院, 湖南, 长沙, 410208;[范婧莹; 史红健; 罗晶婧] 中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室, 中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室, 湖南, 长沙, 410208

关键词： 细胞增殖;干细胞;细胞周期蛋白类;周期蛋白依赖激酶;克隆形成力

摘要： 目的研究鼻咽癌干细胞的增殖特征并初步探讨其分子机制。方法采用无血清悬浮培养法从鼻咽癌细胞CNE2和5-8F获得鼻咽癌干细胞CNE2-SC、5-8F-SC,分别采用细胞存活率分析计数器、细胞平板克隆形成试验观察鼻咽癌干细胞的增殖特性和克隆形成能力,Western blot法检测细胞周期相关蛋白表达水平。结果鼻咽癌干细胞比其来源的鼻咽癌细胞增殖速度显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。鼻咽癌干细胞克隆形成率显著高于其来源鼻咽癌细胞(P<0.01),但肿瘤干细胞克隆显著小于其来源细胞。与普通鼻咽癌细胞比较,鼻咽癌干细胞的细胞周期蛋白CylinD1、CylinD3及细胞周期调控蛋白CDK2、CDK4、CDK6的表达水平显著下调(P<0.01)。结论鼻咽癌干细胞比其来源的鼻咽癌细胞生长增殖缓慢,可能与其细胞周期蛋白和周期蛋白依赖激酶表达水平下调有关。

语种： 中文

作者： 戴娜;范婧莹;陶怀（陶怀）;周芳亮（周芳亮）;胡梅（胡梅）;...

期刊： 教育教学论坛,2018年(21):48-50 ISSN：1674-9324

作者机构： 湖南中医药大学研究生学院;湖南中医药大学医学院;[范婧莹] 中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室;[陶怀; 周芳亮; 胡梅; 宋岚; 何迎春; 戴娜] 湖南中医药大学

关键词： 大学精神;本质;培养;高等教育

摘要： 大学精神是大学物质文明与精神文明建设成果的主要体现,也是大学文化"软实力"的具体表现。当代大学生是大学精神的继承者和辐射者。在大学生综合素质培养的过程中,如何理解大学精神,构建与弘扬大学精神,是值得当下高等教育参与者研究的课题。

语种： 中文

作者： 蔺婷（蔺婷）;范婧莹;何迎春;聂慧芳

期刊： 科教导刊,2018年(21):99-100 ISSN：1674-6813

作者机构： 湖南中医药大学中西医结合学院 湖南·长沙 410208;湖南中医药大学医学院 湖南·长沙 410208;[蔺婷; 何迎春; 聂慧芳; 范婧莹] 湖南中医药大学

关键词： 理论实践一体化教学;中西医结合耳鼻咽喉科学;中西医结合

摘要： 中西医结合耳鼻咽喉科学是中西医结合专业的一门核心临床课程,但是由于理论内容繁多,实践操作要求高,课时少,教学质量难以提高.理论实践一体化教学是一种新型的教学模式,不仅有助于改善单调的教学方法,提高教学质量,更能突出培养学生临床操作技能,充分激发学生的学习热情.现从理论实践一体化教学的重要性、现状以及如何改善所采取的措施等三个方面进行分析,试图为提高中西医结合耳鼻咽喉科学课程的教学质量提供参考.

语种： 中文

作者： 胡晶;戴娜;徐冰雁;周芳亮（周芳亮）;蔺婷（蔺婷）;...

期刊： 中国中药杂志,2018年43(6):1221-1227 ISSN：1001-5302

通讯作者： He, Y.-C.

作者机构： 湖南中医药大学研究生院,湖南长沙410208;湖南中医药大学医学院,湖南长沙410208;湖南中医药大学研究生院,湖南长沙,410208;中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室,湖南长沙410208;中医五官湖南省重点学科,湖南长沙410208

通讯机构： College of Medicine, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, China

关键词： 益气解毒方;鼻咽癌;细胞增殖;MAPK/ERK信号通路

摘要： 该文研究益气解毒方水提物对人鼻咽癌CNE2细胞增殖的抑制作用,并初步探讨其作用机制,为益气解毒方的临床应用提供新的理论依据。用不同质量浓度(0.125,0.25,0.5,1.0 g·L~(-1))的益气解毒方水提物、阳性对照药(顺铂,4.0 mg·L~(-1))、抑制剂PD98059(50 μmol·L~(-1))、激活剂isoproterenol hydrochloride(ISO,20 μmol·L~(-1))、激活剂ISO+益气解毒方水提物0.5 g·L~(-1)处理CNE2细胞,使用实时无标记细胞功能分析仪(RTCA)和CCK-8法检测细胞增殖活性,并计算出半数抑制浓度(IC_(50)),用荧光双染流式细胞仪PI染色检测药物作用后细胞周期分布情况;Western blot法检测周期相关蛋白和MAPK/ERK信号通路相关蛋白的表达水平。RTCA和CCK-8法检测结果显示,与正常培养组比较,益气解毒方水提物能够有效抑制CNE2细胞增殖(P<0.01),呈剂量和时间依赖性,48 h IC_(50)为0.5 g·L~(-1);细胞周期结果显示,水提物处理48 h后,G_0/G_1期比例降低,G_2/M期比例增加,阻滞细胞周期于G_2/M期(P<0.01);Western blot实验结果显示,经过不同浓度水提物处理48 h后,细胞周期相关蛋白cyclinD1,cyclinD3,CDK2表达下调,MAPK/ERK信号通路相关蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2表达明显下调,与对照组相比差异具有统计学意义(P<0.05);在此基础上,加入MAPK/ERK信号通路的激活剂和抑制剂,结果显示,加入激活剂ISO,细胞增殖明显高于正常培养组,周期相关蛋白cyclinD1,cyclinD3,CDK2表达量均提高,同时,该信号通路关键蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2的表达量也相对上升;而加入抑制剂PD98059后,细胞增殖明显低于正常培养组,相应蛋白的表达量亦降低,与对照组相比差异明显(P<0.05)。益气解毒方水提物主要通过下调MAPK/ERK信号通路关键蛋白p-c-Raf,p-MEK,p-ERK1/2的表达,阻滞细胞周期,抑制CNE2细胞增殖。

语种： 中文

作者： 范婧莹;戴娜;何迎春;田道法

期刊： 中国中医药现代远程教育,2018年16(21):21-22 ISSN：1672-2779

作者机构： 湖南中医药大学中西医结合学院,湖南长沙410208;中医药防治眼耳鼻咽喉疾病湖南省重点实验室,湖南长沙410208;湖南中医药大学医学院,湖南长沙410208;[何迎春; 田道法; 戴娜; 范婧莹] 湖南中医药大学

关键词： 说课;分泌性中耳炎;中西医结合耳鼻咽喉科学;教学改革

摘要： 说课是一种重要的教研活动,主要通过口头阐述的方法介绍教学内容、教学流程、教学设计意图和教学效果等.本文结合中西医临床医学专业学生的情况,针对中西医结合耳鼻咽喉科学课程中“分泌性中耳炎”这一教学内容,从说教材、说目标、说学情、说教法、说教学过程和教学反思6个方面设计说课方案,以期提高教学质量,深化教学改革与创新.

语种： 中文