Neuroprotective effect of borneol combined with astragaloside IV and Panax notoginseng saponins in cerebral ischemia reperfusion injury rat model through Notch signaling pathway [冰片配伍黄芪甲苷和三七总皂苷通过Notch信号通路对大鼠脑缺血再灌注损伤模型的神经保护作用]
作者：
欧阳波;刘晓丹;杨筱倩;丁煌;黄小平;...
期刊：
中草药 ,2020年51(23):5990-5997 ISSN：0253-2670
通讯作者：
Deng, C.-Q.;Huang, X.-P.
作者机构：
[杨筱倩; 欧阳波; 刘晓丹; 黄小平; 邓常清; 丁煌] Hunan Key Laboratory of Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Cardio-cerebral Diseases, Key Laborator of Cell Biology and Molecular Techniques of Hunan Universities, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, 410208, China
通讯机构：
[Huang, X.-P.; Deng, C.-Q.] H;Hunan Key Laboratory of Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Cardio-cerebral Diseases, China
关键词：
冰片;黄芪甲苷;三七总皂苷;脑缺血再灌注损伤;神经元;微血管
摘要：
目的从Notch信号通路探讨冰片配伍黄芪甲苷（astragaloside Ⅳ,AST Ⅳ）和三七总皂苷（Panaxnotoginseng saponins,PNS）对大鼠脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIRI）模型的神经保护作用。方法 SD大鼠随机分为假手术组、模型组、冰片（7.5 mg/kg）组、PNS（25 mg/kg）组、AST Ⅳ（10 mg/kg）组、AST Ⅳ（10 mg/kg）+PNS（25 mg/kg）组、冰片（7.5 mg/kg）+AST Ⅳ（10 mg/kg）+PNS（25 mg/kg）低剂量组、冰片（15 mg/kg）+AST Ⅳ（20mg/kg）+PNS（50 mg/kg）高剂量组、依达拉奉（4 mg/kg）组。假手术组、模型组ig 0.5%CMC-Na,依达拉奉组ip相应药物,其余各组ig相应药物,2次/d,间隔12h。末次给药后2h采用线栓法阻断大鼠右侧大脑中动脉,建立CIRI模型。缺血2 h,再灌注22 h后,进行神经功能缺损评分;HE染色法观察缺血皮质区病理变化;免疫组化法检测神经元特异性核蛋白（neuron specific nuclear,NeuN）、内皮屏障抗原蛋白（endothelial barrier antigen,EBA）表达;Western blotting法检测血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor,VEGF）、Notch1、Notch胞内域（intracellular domain of Notch,NICD）蛋白表达。结果模型组大鼠神经功能缺损评分和细胞损伤率显著增加（P<0.01）;各给药组大鼠神经功能缺损评分和细胞损伤率显著降低（P<0.05、0.01）,冰片+AST Ⅳ+PNS组的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS组（P<0.05、0.01）。模型组大鼠缺血皮质区Neu N、EBA蛋白表达均显著降低（P<0.01）;各给药组Neu N、EBA蛋白表达显著增加（P<0.05、0.01）,冰片+AST Ⅳ+PNS组的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS组（P<0.05、0.01）。模型组大鼠缺血皮质区VEGF蛋白表达显著增加（P<0.05）,NICD、Notch1蛋白表达无显著变化;冰片+ASTⅣ+PNS组VEGF、NICD、Notch1蛋白表达显著上调（P<0.01）,且3种药物配伍的效应强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS（P<0.05、0.01）。结论冰片、AST Ⅳ、PNS具有抗脑缺血再灌注后神经元和脑微血管损伤的作用,3种药物配伍的作用强于各药物单用及AST Ⅳ+PNS,其作用可能与激活Notch信号通路、上调VEGF表达,从而发挥对缺血脑组织的保护作用有关。
语种：
中文
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冰片配伍黄芪甲苷与三七总皂苷对脑缺血/再灌注后血脑屏障通透性的影响
作者：
丁煌;唐三;杨筱倩;刘晓丹;黄小平;...
期刊：
中国药理学通报 ,2019年35(11):1516-1523 ISSN：1001-1978
作者机构：
[丁煌; 唐三; 杨筱倩; 邓常清; 黄小平; 刘晓丹] Molecular Pathology Lab, Key Lab of Hunan Province for Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Cardio-cerebral Diseases, Key Lab of Hunan Universities for Cell Biology and Molecular Techniques, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, 410208, China
关键词：
冰片;黄芪甲苷;三七总皂苷;脑缺血/再灌注;血脑屏障;紧密连接蛋白
摘要：
目的探讨冰片、黄芪甲苷(AST Ⅳ)和三七总皂苷(PNS)配伍对脑缺血/再灌注后血脑屏障(BBB)的影响。方法脑缺血/再灌注大鼠灌胃给药,观察神经功能缺损症状,测定脑组织含水量和BBB通透性、闭锁小带蛋白1(ZO-1)、 ZO-2、咬合蛋白(Occludin)及闭合蛋白5(Claudin-5)表达。结果脑缺血/再灌注后,大鼠出现神经功能缺损症状,神经功能评分和脑含水量增加,BBB破坏。各药物能不同程度减轻上述病理改变,冰片+ AST Ⅳ+ PNS效应最强,优于药物单用及AST Ⅳ+ PNS。脑缺血/再灌注后,ZO-1、ZO-2、Occludin、Claudin-5表达减少。各药物使ZO-1增加,除AST Ⅳ外,上调Occludin表达;冰片+ AST Ⅳ+ PNS还明显上调ZO-2,且上调ZO-1、ZO-2、Occludin的效应优于药物单用及AST Ⅳ+ PNS。结论冰片、AST Ⅳ和PNS能不同程度降低脑缺血/再灌注后BBB通透性的增加,减轻脑水肿,对抗脑组织损伤,三药合用有增强效应,机制可能与协同抑制缺血后ZO-1、ZO-2、Occludin表达下调,保护BBB有关。
语种：
中文
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依托大学生创新训练中心开展课外科技活动提升独立学院学生创新能力的应用研究
作者：
李玲;刘慧萍;丁煌;何清湖
期刊：
科教导刊 ,2019年(5):171-172,190 ISSN：1674-6813
作者机构：
湖南中医药大学中医学院 湖南·长沙 410208;湖南中医药大学医学院 湖南·长沙 410208;[何清湖; 刘慧萍; 丁煌; 李玲] 湖南中医药大学
关键词：
课外科技活动;独立学院;创新能力
摘要：
目的:依托大学生创新训练中心,对独立学院学生开展课外科技活动,提升独立学院学生创新能力,有助于中医药院校独立学院学生适应当下社会对综合性高素质人才的需求。方法:依托大学生创新训练中心,结合二级学院的专业特点、分不同年级、根据兴趣双向选择,自主设计科研课题,通过参加实验设计、动手操作、记录分析和处理结果等综合评价中医药课外科技活动在提升独立学院学生创新能力的作用。结果:依托大学生创新训练中心的课外科技活动成果以论文为形式,在很大程度上提升了独立学院学生的创新能力,受益学生每学年约500人次。结论:依托一个具备较成熟的课外科技活动实施体系的大学生创新训练中心,开设一些高水平实验,在很大程度上能够提升独立学院学生创新能力。
语种：
中文
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黄芪甲苷配伍三七总皂苷对OGD/R大鼠骨髓间充质干细胞增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响
作者：
刘晓丹;丁煌;邓常清
期刊：
中草药 ,2019年50(23):5795-5801 ISSN：0253-2670
通讯作者：
Deng, C.-Q.
作者机构：
[丁煌; 邓常清; 刘晓丹] Molecular Pathology Laboratory, Hunan Key Laboratory of Cerebrovascular Disease Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Key Laboratory of Hunan University for Cell Biology and Molecular Techniques, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, 410208, China
通讯机构：
[Deng, C.-Q.] M;Molecular Pathology Laboratory, Hunan Key Laboratory of Cerebrovascular Disease Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Key Laboratory of Hunan University for Cell Biology and Molecular Techniques, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, China
关键词：
黄芪甲苷;三七总皂苷;骨髓间充质干细胞;脑缺血再灌注;凋亡;迁移;神经分化
摘要：
目的观察黄芪甲苷(AST IV)配伍三七总皂苷(PNS)对氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖、凋亡、迁移及神经分化的影响。方法全骨髓贴壁法分离、培养、扩增、纯化BMSCs,流式细胞仪检测BMSCs表面标志物CD29、CD90、CD34、CD45阳性表达率。取第3代BMSCs,采用AST IV与PNS高(100 μmol/L+60 μmol/L)、中(50 μmol/L+30 μmol/L)、低(25 μmol/L+15 μmol/L)剂量配伍预处理24 h,以OGD/R建立缺血再灌注损伤模型,同时设立对照组和模型组。CCK-8法测定细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移,巢蛋白(Nestin)/神经元特异性烯醇化酶(NSE)、Nestin/胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫荧光双标观察BMSCs向神经元及星形胶质细胞分化情况。结果成功培养分离BMSCs,流式细胞仪检测CD29、CD90阳性率分别为94.23%、94.69%;而CD34、CD45阳性表达率分别为5.76%、5.31%;与对照组比较,模型组细胞存活数量明显减少(P<0.05)、细胞凋亡率显著增加(P<0.05),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMSCs增殖(P<0.05、0.01),并抑制细胞凋亡(P<0.05、0.01);与对照组比较,模型组、AST IV与PNS不同剂量配伍均能促进BMSCs迁移(P<0.05),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组的迁移细胞数量明显增加(P<0.05);与对照组比较,模型组与AST IV与PNS不同剂量配伍组均能促进BMSCs向神经元及星形胶质细胞分化(P<0.01),与模型组比较,AST IV与PNS不同剂量配伍组的Nestin/NSE、Nestin/GFAP阳性表达率明显增高(P<0.01)。结论AST IV配伍PNS在体外能促进缺血再灌注模型BMSCs增殖、迁移,抑制其凋亡,并诱导其向神经元、星形胶质细胞定向分化。
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中医药类高校教学实验室安全管理及虚拟仿真实验室的应用
作者：
李玲;刘慧萍;谭峰;丁煌
期刊：
科教导刊 ,2019年(6):174-175 ISSN：1674-6813
作者机构：
湖南中医药大学中医学院 湖南·长沙 410208;[刘慧萍; 丁煌; 谭峰; 李玲] 湖南中医药大学
关键词：
高校教学实验室;安全;虚拟仿真实验室
摘要：
随着实验教学在基础医学类教学中占据的位置越来越重要,在实验室各项制度不断完善的同时,实验室安全问题也越来越凸显。本文针对我校基础医学实验室的相关教学现状和存在的问题进行了归纳,发现人为因素和设备物品是影响实验室安全最主要的隐患,针对这些问题,我校对实验室的安全管理提出了一些措施,主要包括在废弃物的处理,试剂及设备的安全问题以及在教育上等几个方面,同时,我校积极引进了虚拟仿真实验平台,该平台的推广不仅提高了学生的学习效率,同时也减少了很多实验室安全问题,但目前其应用还不广泛,下一步希望扩大其应用,以实现效果最大化。
语种：
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冰片对黄芪甲苷和三七总皂苷配伍有效成分在脑缺血/再灌注模型大鼠脑组织分布的影响
作者：
刘晓丹;杨筱倩;唐三;丁煌;黄小平;...
期刊：
中草药 ,2019年50(7):1649-1656 ISSN：0253-2670
通讯作者：
Huang, X.-P.
作者机构：
湖南中医药大学分子病理实验室, 中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室;细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室, 湖南, 长沙, 410208;[丁煌] 丁煌;[杨筱倩] 杨筱倩;[唐三] 唐三
通讯机构：
[Huang, X.-P.] K;Key Laboratory of Hunan Province for Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Cardio-Cerebral Diseases, Key Laboratory of Hunan University for Cell Biology and Molecular Techniques, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, China
关键词：
脑缺血再灌注;冰片;黄芪甲苷;三七总皂苷;配伍;血脑屏障;药物吸收;人参皂苷Rb1;人参皂苷Rg1;三七皂苷R1
摘要：
目的探讨冰片是否具有促进黄芪甲苷(AST IV)和三七总皂苷(PNS)配伍时主要有效成分透过大脑中动脉栓塞(MCAO)再灌注模型大鼠血脑屏障的作用。方法大鼠随机分为假手术组、模型组、冰片组、AST IV 组、PNS 组、AST IV+PNS组、冰片+AST IV+PNS 组,制备MCAO 再灌注大鼠模型,以液相色谱-质谱联用法(LC-MS/MS)测定大鼠患侧与健侧大脑皮层、小脑中AST IV和PNS 有效成分(人参皂苷Rg_1、Rb_1和三七皂苷R_1)的含量。结果 AST IV 无论是单用还是与 PNS、冰片配伍,其口服后主要分布在大脑皮层,尤其是患侧大脑皮层。冰片+AST IV+PNS 能使患侧与健侧大脑皮层中 AST IV 含量显著增加。PNS 单用,其有效成分人参皂苷Rg_1、Rb_1和三七皂苷R_1主要分布在患侧小脑。冰片+AST IV+PNS 能使患侧大脑皮层中人参皂苷Rb_1含量显著增加,使健侧和患侧大脑皮层中人参皂苷Rg_1含量增加,使大脑皮层尤其是患侧大脑皮层及小脑中三七皂苷R_1含量增加。结论大鼠脑缺血再灌注后,AST IV 与PNS 的有效成分人参皂苷Rb_1、Rg_1及三七皂苷R_1在大脑皮层和小脑均有一定的分布。AST IV 单用时,AST IV 主要分布在大脑皮层;PNS 单用时,人参皂苷Rb_1、 Rg_1及三七皂苷R_1主要分布在小脑。冰片与AST IV、PNS 合用后,能促进AST IV 及人参皂苷Rb_1、Rg_1及三七皂苷R_1向大脑皮层富集,尤其是向缺血再灌注侧大脑皮层富集;而且能不同程度地促进AST IV,人参皂苷Rb_1、Rg_1及三七皂苷R_1在大脑皮层的吸收,尤其是在患侧大脑皮层的吸收。
语种：
中文
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冰片配伍黄芪甲苷与三七总皂苷对脑缺血再灌注大鼠血脑屏障转运蛋白的影响
作者：
唐三;丁煌;杨筱倩;陈仙蕾;黄小平;...
期刊：
中草药 ,2019年50(18):4389-4397 ISSN：0253-2670
通讯作者：
Huang, X.-P.
作者机构：
[陈仙蕾; 丁煌; 唐三; 黄小平; 邓常清; 杨筱倩] Molecular Pathology Laboratory, Key Laboratory of Hunan Province for Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Cardio-Cerebral Diseases, Key Laboratory of Hunan Universities for Cell Biology and Molecular Techniques, Hunan University of Chinese Medicine, Changsha, 410208, China
通讯机构：
[Huang, X.-P.] M;Molecular Pathology Laboratory, China
关键词：
冰片;黄芪甲苷;三七总皂苷;脑缺血再灌注;血脑屏障;转运蛋白
摘要：
目的从血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)转运蛋白角度探讨冰片配伍黄芪甲苷(astragalosides IV,AST IV)和三七总皂苷(Panax notoginseng saponins,PNS)在脑缺血再灌注状态下促进药物成分入脑的作用。方法采用大鼠局灶性脑缺血再灌注模型,ig给予冰片、AST IV、PNS及其配伍药物,2,3,5-氯化三苯四氮唑(2,3,5-triphenyl tetrazolium chloride, TTC)染色法测定脑组织损伤,Western blotting法检测脑组织外排蛋白P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)和多药耐药相关蛋白1(multidrug resistance protein-1,MRP-1)、MRP-2、MRP-4、MRP-5及摄取蛋白有机阳离子转运体3(organic cation transporter 3,OCT3)、有机阴离子转运多肽-2(organicanion transporting polypeptides-2,OATP-2)蛋白的表达,real-time PCR法检测脑组织多药耐药(multidrug resistance,mdr)基因mdr1a、mdr1b和mrp-1、mrp-2、mrp-4、mrp-5 mRNA表达。结果TTC染色结果显示,脑缺血再灌注后,大鼠脑组织出现明显梗死灶。各药物能显著减少脑梗死体积,AST IV+PNS的效应强于AST IV与PNS单用,冰片+AST IV+PNS的效应强于各药物单用及AST IV+PNS。外排蛋白和基因检测显示,脑缺血再灌注后,大鼠脑组织P-gp、MRP-1、MRP-2、MRP-4、MRP-5蛋白表达均显著增多。与模型组比较,冰片能显著下调大鼠脑组织P-gp、MRP-2、MRP-4蛋白表达水平,PNS能显著下调MRP-4、MRP-5蛋白表达水平,AST IV、AST IV+PNS与冰片+ AST IV+PNS能显著下调P-gp、MRP-2、MRP-4、MRP-5蛋白表达水平,且冰片+AST IV+PNS的效应显著强于各药物单用及AST IV+PNS,AST IV+PNS的效应显著强于AST IV或PNS单用。基因表达结果与蛋白表达结果类似。摄取蛋白检测结果显示,与对照组比较,脑缺血再灌注后大鼠脑组织OCT-3蛋白表达在模型组及各给药组变化均不明显,而模型组OATP-2蛋白表达水平显著降低。PNS、AST IV+PNS及冰片+AST IV+PNS能显著上调OATP-2蛋白表达水平,且AST IV+PNS的效应显著强于AST IV、PNS单用,冰片+AST IV+PNS的效应显著强于各药物单用及AST IV+PNS。结论脑缺血再灌注后,脑组织损伤,BBB的主要外排蛋白和基因表达均显著增强,而摄取蛋白OATP-2表达显著降低。冰片配伍AST IV及PNS后,能增强抗缺血性脑损伤的作用,其作用可能与下调BBB中外排蛋白P-gp、MRP-2、MRP-4、MRP-5和相应基因表达,同时上调摄取蛋白OATP-2表达,促使脑组织中冰片、AST IV及PNS有效成分的吸收与富集而发挥药理作用有关。
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中医药类研究生的科研创新能力培养初探及实践
作者：
丁煌;刘慧萍;王宏宝;肖艺;吴霞;...
期刊：
考试周刊 ,2019年(4):3-4 ISSN：1673-8918
作者机构：
湖南省长沙市,湖南中医药大学中医学院;[刘慧萍; 王宏宝; 丁煌; 肖艺; 吴霞; 张国民; 黄姗姗; 李玲] 湖南中医药大学
关键词：
医学基本实验技能训练;研究生;科研创新能力
摘要：
创新是引领发展的第一动力,研究生作为社会核心竞争力的中坚力量,培养具有较强专业知识储备和一定科研创新能力的研究生是高等教育的主要目标。21世纪初在美国启动的EBE计划是一项有影响力的实验教学改革,旨在通过以实验为中心安排教学,全方面提高学生的科研创新能力和医学综合能力。我校自2015年起通过医学基础教学实验中心对学术型硕士开设医学基本实验技能训练课程,从机能、形态、微生物和分子生物学等四大方面对学生的实验技能和科研习惯态度进行训练和培养,以期全方面提高学生的科研创新能力和医学综合能力。结果发现参与该门课程学习的同学,在后期的课题研究过程中,无论在对所研课题的掌握上、课题的进展情况上,还是在发表文章的情况方面以及撰写课题申请书等方面,同没参与过该门课程的同级同学相比较,均取得了较好的效果。
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一种治疗流感的中药组合物
发明/设计人：
李玲;卢芳国
（ ;丁煌;徐菲;廖灿;...
申请/专利权人：
湖南中医药大学
申请/专利号：
CN201810207328.9
申请时间：
2018-03-14
公开号：
CN201810207328.9
公开时间：
2018-06-22
主申请人地址：
410208 湖南省长沙市岳麓区学士路300号
摘要：
本发明公开了一种治疗流感的中药组合物，由五倍子酯提物和甘草配伍组成，所述五倍子酯提物和甘草的质量比为1:(3‑15)。该中药配伍中五倍子具有敛肺降火、涩肠止泻、固精缩尿、止汗、止血、解毒、敛疮等多种临床功效；甘草具有通经脉、利血气、解百药毒的功效。该中药配伍作用效果显著、组成简单、有协同增效作用，质量可控。
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人参皂苷Rg1抗PC12细胞氧糖剥夺复糖复氧后损伤与自噬关系的研究
作者：
黄小平;杨筱倩;李静娴;丁煌;唐标
（ ;...
期刊：
中华中医药杂志 ,2017年32(5):1974-1978 ISSN：1673-1727
作者机构：
[唐标; 刘晓丹; 黄小平; 杨筱倩; 李静娴; 丁煌; 唐映红; 邓常清] 湖南中医药大学分子病理实验室, 长沙, 410208
关键词：
人参皂苷Rgl;PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧;自噬性损伤
摘要：
目的:探讨人参皂苷Rgl (Rgl)对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(OGD/R)诱导的细胞自噬性损伤的作用及作用机制。方法:以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,观察Rgl抗OGD/R后细胞自噬性损伤的作用,并从PI3KI/Akt/m-TOR和PI3KⅢ/Becline-l/Bcl-2信号通路研究其作用机制。结果:Rgl能增加OGD/R诱导的PC12细胞存活、减少乳酸脱氢酶(LDH)漏出;同时抑制细胞自噬体的形成,降低胞浆LC3-Ⅱ阳性斑片的数量、下调LC3-Ⅱ/LC3-I蛋白比值而上调p62蛋白表达。机制研究结果表明,Rgl提高了PI3KI、Akt、m-TOR蛋白磷酸化水平,对PI3KⅢ、Becline-1和Bcl-2蛋白表达没有影响。结论:在缺糖缺氧2h再复糖复氧24h,细胞出现过度自噬和损伤,Rgl均能减轻OGD/R诱导的PC12细胞自噬性损伤,其机制可能与激活PI3KI/Akt/m-TOR信号通路有关。
语种：
中文
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黄芪甲苷与人参皂苷Rgl配伍抗PC12细胞氧糖剥夺/复糖复氧后自噬性损伤相互作用的研究
作者：
丁煌;李静娴;唐标
（ ;刘晓丹
（ ;李玲;...
期刊：
中国药理学通报 ,2017年33(2):235-243 ISSN：1001-1978
作者机构：
[唐标; 邓常清; 刘晓丹; 丁煌; 李静娴; 李玲; 唐映红; 黄小平] 湖南中医药大学分子病理实验室, 中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室;[唐标; 邓常清; 刘晓丹; 丁煌; 李静娴; 李玲; 唐映红; 黄小平] 细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室, 湖南, 长沙, 410208
关键词：
黄芪甲苷;人参皂苷Rgl;配伍;PC12细胞;细胞自噬;Isobologram分析;相互作用
摘要：
目的探讨黄芪甲苷和人参皂苷Rgl配伍对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(oxygen glucose deprivation/reoxygenation,OGD/R)诱导的细胞自噬性损伤的影响及其相互作用。方法以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,分别设立黄芪甲苷和人参皂苷Rgl不同剂量,药物干预细胞后,以激光共聚焦显微镜检测自噬体评价药物对细胞自噬性损伤的作用,并计算药物的半数抑制浓度(median inhibitory concentration, IC_(50))。以黄芪甲苷和人参皂苷Rgl的IC_(50)为1个剂量单位,按Isobologram法分别设立黄芪甲苷与人参皂苷Rgl不同比例(1:2、1: 1、2: 1)的配伍,研究药物对细胞自噬的影响,计算各比例配伍的IC_(50),采用Isobologram及可信区间和相互作用指数γ分析黄芪甲苷与人参皂苷Rgl配伍抑制自噬的相互作用性质。在此基础上,以黄芪甲苷与人参皂苷Rgl的IC_(50)剂量进行1: 1配伍,以细胞存活率、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)漏出率、自噬体数量及p62蛋白表达评价药物配伍对细胞损伤和细胞自噬的影响。结果黄芪甲苷与人参皂苷Rgl抑制自噬的IC_(50)及其95%可信区间分别为(27.22 ±0.6l4)mg · L~(-1)[25.96, 29.03]、(13.68± 1.334) mg · L ~(-1)[10.27, 16.95]。黄芪甲苷与人参皂苷Rgl在1: 1配伍时呈现协同增效作用,而黄芪甲苷与人参皂苷Rgl在1: 2和2: 1配伍时,呈拮抗作用。以黄芪甲苷和人参皂苷Rgl的IC_(50)剂量进行1: 1配伍验证,结果显示单用黄芪甲苷和人参皂苷Rgl以及配伍均能增强细胞存活率,减轻LDH漏出,减少自噬体数量和LC3-Ⅱ蛋白数量,增加p62蛋白表达,且配伍组效应强于黄芪甲苷与人参皂苷Rgl单用组。析因设计实验分析表明,以黄芪甲苷和人参皂苷Rgl的IC50剂量进行1: 1配伍时,对细胞存活、LDH漏出及自噬体形成均存在交互作用。结论在缺糖缺氧2h再复糖复氧24 h,细胞出现过度自噬和细胞损伤,黄芪甲苷和人参皂苷Rgl以IC_(50)剂量进行1: 1配伍时,对细胞自噬性损伤具有协同抑制作用。
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益肺通络颗粒体外抗结核及止咳止血作用研究
作者：
刘莎;彭晓珊;丁煌;石国民;唐映红
期刊：
湖南中医药大学学报 ,2017年37(4):349-352 ISSN：1674-070X
作者机构：
[唐映红; 丁煌; 彭晓珊; 刘莎] 湖南中医药大学;[石国民] 长沙市中心医院
关键词：
益肺通络颗粒;抗结核;止咳;止血;碳粒廓清指数;结核分枝杆菌
摘要：
目的 研究益肺通络颗粒体外抗结核、止血、止咳作用及对非特异免疫功能的影响,为其临床应用提供实验依据.方法 用人型结核分枝杆菌标准菌株（H37Rv）和临床分离的结核分枝杆菌敏感菌株和耐药菌株,接种于含有不同浓度益肺通络颗粒的培养基中,观察结核杆菌的生长情况;应用剪尾法、毛细管法测定小鼠的出血时间、凝血时间,观察益肺通络颗粒的止血作用;用氨水引咳,观察其止咳作用;通过巨噬细胞碳粒廓清试验,观察其对非特异性免疫功能（廓清指数和校正廓清指数）的影响.结果 益肺通络颗粒在高浓度（0.01~0.2 g/mL）时对结核分枝杆菌有显著的抑菌作用,但随着浓度降低,其抑菌效果也显著减弱,浓度减低至0.025 g/mL以下时抑菌作用不明显;与对照组小鼠出血时间（321.2±34.3）s、 凝血时间（135.8±5.1）s比较,益肺通络高剂量组小鼠出血时间（169.5±23.0）s、凝血时间（97.5±3.3）s均显著缩短（P〈0.01）;与对照组小鼠氨水引咳的潜伏期（36.4±1.9）s、5 min内小鼠的咳嗽次数（45.9±3.1）次比较,益肺通络高剂量组小鼠氨水引咳的潜伏期（54.1±1.4）s显著延长、5 min内小鼠的咳嗽次数（22.7±2.2）次显著减少（P〈0.01）;且小鼠廓清指数和校正廓清指数较对照组均有显著提高（P〈0.01）.结论 益肺通络颗粒具有体外抗结核作用,具有止血止咳和增强非特异性免疫功能的作用.
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补肾活血方含药血清对卵巢颗粒细胞ActA/Smads信号通路的影响
作者：
刘慧萍;陈明辉;李玲;彭胡战;丁煌;...
期刊：
时珍国医国药 ,2016年27(12):2857-2861 ISSN：1008-0805
作者机构：
[刘慧萍; 陈明辉; 李玲; 彭胡战; 丁煌; 王灿; 张国民] 湖南中医药大学, 湖南, 长沙, 410208
关键词：
补肾活血方;卵巢颗粒细胞;信号通路
摘要：
目的探讨补肾活血方含药血清对体外培养的大鼠卵巢颗粒细胞增殖分化及ActA /Smads信号传导通路的影响。方法采用机械分离法建立SD大鼠卵巢颗粒细胞体外培养体系。大鼠随机分为中药组,FSH组,胎牛血清组,无血清组。中药组再分为1%、5%、10%、15%、20%不同浓度含药血清培养液组,FSH组含FSH 25ng /ml,胎牛血清组含15%胎牛血清。ELISA检测E2、P的分泌量。另设体外培养的颗粒细胞含药血清高、中、低剂量组,生理盐水组、FSH组、无血清组,空白组,分别于1h、2h、6h、12h、24h、48h后ELISA法测定ActA分泌量及免疫组化SP法测定ActRⅡA、Smad2、Smad3表达量。结果免疫组化FSHR阳性率大于95%。15%BSHX含药血清E2分泌量最高,各组差异有统计学意义,P < 0.05;各组P分泌量无显著差异,P > 0.05。BSHX含药血清组ActA分泌量与时间存在一定的依赖性,12h后出现峰值,最佳剂量为中剂量组;各BSHX含药血清组中ActRⅡA、Smad2、Smad3免疫染色主要位于细胞核,且均与时间存在一定的依赖性, 12h后出现峰值。结论BSHX含药血清能促进体外培养的卵巢颗粒细胞增殖和分化,促进其E_2、P的分泌。通过促进ActA的分泌量和上调ActRⅡA、Smad2、Smad3表达来影响ActA/Smads信号通路的传导。
语种：
中文
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Effects of Astragaloside Ⅳ combined with Ginsenoside Rg1 on autophagy and PI3K signaling pathways of PC12 cell induced by oxygen glucose deprivation/reoxygenation
作者：
DING Huang;LI Jing-xian;YANG Xiao-qian;TANG Biao;LIU Xiao-dan;...
作者机构：
[DING Huang; LI Jing-xian; YANG Xiao-qian; TANG Biao; LIU Xiao-dan; TANG Ying-hong; DENG Chang-qing; HUANG Xiao-ping] Molecular Pathology Laboratory,Key Laboratory of Hunan Province for Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Cardio-Cerebral Diseases,Key Laboratory of Hunan Universities for Cell Biology and Molecular Techniques,Hunan University of Chinese Medicine
会议名称：
2016年国际生理学学术大会
会议时间：
2016-09-25
会议地点：
中国北京
摘要：
AIM: To probe the effects and the mechanism of Astragaloside IV and Ginsenoside Rg1 on autophagy of PC12 cell induced by oxygen glucose deprivation/reoxygenation(OGD/R).METHODS: The autophagy injury m
语种：
英文
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黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺复糖复氧后细胞自噬和PI3K信号通路的影响
作者：
丁煌;李静娴;杨筱倩;唐标
（ ;刘晓丹
（ ;...
期刊：
中国病理生理杂志 ,2016年32(11):2003-2009 ISSN：1000-4718
作者机构：
[唐标; 刘晓丹; 丁煌; 李静娴; 杨筱倩; 唐映红; 邓常清; 黄小平] 湖南中医药大学分子病理实验室, 中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室;[唐标; 刘晓丹; 丁煌; 李静娴; 杨筱倩; 唐映红; 邓常清; 黄小平] 细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室, 湖南, 长沙, 410208
关键词：
黄芪甲苷;人参皂苷Rg1;PC12细胞;自噬;PI3K Ⅰ/Akt /mTOR信号通路;PI3K Ⅲ/beclin-1 / Bcl-2信号通路
摘要：
目的:探讨黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍对PC12细胞氧糖剥夺后再复糖复氧(oxygen glucose deprivation /reoxygenation,OGD/R)诱导的细胞自噬的影响及作用机制。方法:以PC12细胞建立OGD/R自噬性损伤模型,观察黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍对细胞自噬的影响,并通过PI3K Ⅰ/Akt /mTOR和PI3K Ⅲ/beclin-1 / Bcl-2信号通路研究黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍的作用机制。结果:氧糖剥夺2 h复糖复氧24 h后,PC12细胞内LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值增加。黄芪甲苷、人参皂苷Rg1及黄芪甲苷与人参皂苷Rg1配伍均能下调OGD/R后PC12细胞LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ蛋白比值,且配伍组的效应强于药物单用组。机制研究表明,人参皂苷Rg1单用及黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍能升高PI3K Ⅰ、Akt、mTOR蛋白磷酸化水平,配伍的效应强于药物单用;黄芪甲苷单用及黄芪甲苷和人参皂苷Rg1配伍均能抑制PI3K Ⅲ、beclin-1蛋白表达,而配伍还能上调Bcl-2蛋白表达,且配伍的效应强于药物单用组。结论: PC12细胞在缺糖缺氧2 h再复糖复氧24 h后,细胞出现自噬;黄芪甲苷和人参皂苷Rg1均能减轻OGD/R诱导的PC12细胞自噬,且2者配伍对细胞自噬具有协同抑制作用,其机制可能与调节PI3K Ⅰ/Akt /mTOR和PI3K Ⅲ/beclin-1 /Bcl-2信号通路有关。
语种：
中文
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PC12细胞氧糖剥夺模型细胞自噬与损伤的关系及黄芪甲苷的保护作用研究
作者：
黄小平;李静娴;杨筱倩;丁煌;唐标
（ ;...
期刊：
世界中医药 ,2016年11(4):597-603 ISSN：1673-7202
作者机构：
湖南中医药大学分子病理实验室,中西医结合心脑疾病防治湖南省重点实验室,细胞生物学与分子技术湖南省高校重点实验室,长沙,410208;[唐标; 刘晓丹; 黄小平; 丁煌; 邓常清; 杨筱倩; 李静娴] 湖南中医药大学
关键词：
PC12细胞;氧糖剥夺再复糖复氧;细胞自噬;细胞损伤;黄芪甲苷;保护作用
摘要：
目的：研究PC12细胞OGD/R后自噬与损伤的经时性变化以及黄芪甲苷的干预效应。方法：探讨PC12细胞OGD/R后不同时间自噬的变化及与细胞损伤的关系,初步确定细胞发生自噬性损伤的时间点,再制作PC12细胞OGD/R自噬性损伤模型,研究黄芪甲苷抗自噬性损伤的作用。结果：复糖复氧6~36 h后,细胞存活率降低、LDH漏出率增加;用3-MA预处理后,可使复糖复氧6~12 h细胞存活率降低、LDH漏出率增加,复糖复氧后24~36 h相反。激光共聚焦和western-blot检测显示,复糖复氧后6 h LC3、LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值增加,至24 h达高峰;p62蛋白表达随再复糖复氧时间的延长逐渐降低。黄芪甲苷对OGD 2 h复糖复氧24 h的PC12细胞自噬具有显著抑制作用,且呈剂量依赖性。结论：PC12在在OGD复糖复氧6~12 h,自噬减轻神经细胞的损伤,而在24~36 h后加重细胞损伤;黄芪甲苷可通过抑制细胞过度自噬诱导的细胞损伤,从而发挥对受损细胞的神经保护作用。
语种：
中文
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PM2.5对MLE-12细胞的损伤及水通道蛋白5mRNA表达的影响
作者：
刘平安;黄惠勇
（ ;张国民;莫阳;吴东升;...
期刊：
中华中医药学刊 ,2015年33(11):2681-2684 ISSN：1673-7717
作者机构：
[黄惠勇; 张彧; 张晨阳; 丁煌; 莫阳; 张国民; 吴东升; 刘平安] 湖南中医药大学
关键词：
大气细颗粒物;炎性因子;水通道蛋白5
摘要：
目的:研究大气细颗粒物(PM 2.5)对体外培养的肺泡Ⅱ型上皮细胞系MLE-12细胞活性、炎性因子分泌及其水通道蛋白5mRNA表达的影响,探讨PM 2.5对呼吸系统的损伤及其机制.方法:采集大气中的PM2.5,并制成悬浮液,MLE-12细胞暴露于不同浓度的PM2.5处,用MTr比色法测定细胞存活力,放射免疫法测定炎性因子TNF-α、IL-6和IL-8的含量,荧光实时定量PCR法检测AQP5 mRNA的表达.结果:MTT实验中不同浓度的PM2.5作用于MLE-12细胞24 h、48 h后,细胞存活率显著下降,并呈浓度效应关系.炎性因子测定中,随着PM2.5浓度的增加,PM2.5诱导MLE-12细胞产生炎性因子TNF-α、IL-6和IL-8的浓度逐渐升高(P＜0.05).在0.025 ～ 0.20 mg/mL的质量浓度范围内,随着PM2.5染毒液浓度的增加,MLE-12中AQP5mRNA表达水平逐渐降低,且与对照组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).结论:PM2.5通过诱导MLE-12细胞的炎症反应及AQP5蛋白表达降低引起MLE-12细胞的活性降低,促进细胞凋亡.
语种：
中文
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五倍子含药血清对A型流感病毒诱导小鼠肺巨噬细胞自噬的干预作用
作者：
李玲;张彧;丁煌;吴东升;张世鹰;...
作者机构：
湖南中医药大学 湖南长沙 410208
会议名称：
世界中医药学会联合会中医药抗病毒研究专业委员会第一届学术年会
会议时间：
2015-07-01
会议地点：
烟台
会议论文集名称：
世界中医药学会联合会中医药抗病毒研究专业委员会第一届学术年会论文集
关键词：
五倍子;A型流感病毒;自噬
摘要：
目的 通过建立A型流感病毒感染肺巨噬细胞模型,研究流感病毒(H1N1型)感染小鼠肺巨噬细胞(RAW264.7)不同时间后自噬的活性变化以及五倍子处理后对自噬的影响.方法 ①用流感病毒感染体外感染小鼠肺巨噬细胞,以荧光定量RT-PCR法鉴定细胞模型建立成功,检测相同病毒浓度不同染毒时间、相同染毒时间不同病毒浓度感染细胞后自噬小体的积累和LC3的型别转化程度.②分选病毒最佳感染时间及病毒浓度,设空白组、正常组、模型组、五倍子组、奥司他韦组,感染组以100 TCID50 2.75,感染6h、12h、24h、36h后分别对应给药10ul.24及48小时后用MTT法检测细胞存活率；用Western Blotting检测自噬相关蛋白LC3的表达情况.结果 ①激光共聚焦显微镜观察显示,与阳性组相比,模型组流感病毒感染细胞后在各个时间段均可以在细胞核周围观察到自噬小体,其中感染24h自噬小体积累最为显著.②Western Blotting结果显示,与模型组相比,五倍子组、奥司他韦组分别干预染毒细胞后LC3-Ⅱ的水平均降低后能降低染毒细胞中胞浆中的蛋白的型别转换程度,其中以五倍子干预效果最优.结论 A型流感病毒感染后能诱导小鼠肺巨噬细胞发生自噬,五倍子干预处理后LC3-Ⅱ水平降低,表明五倍子可能会通过某种机制调节自噬使自噬维持在较低水平,从而减少病毒感染对细胞造成的损伤.
语种：
中文
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黄芪和三七有效成分对脑缺血再灌注后细胞凋亡的影响
作者：
欧阳翌国;丁煌;邓常清
（ ;唐映红;黄小平
期刊：
吉林医药学院学报 ,2015年(6):437-440 ISSN：1673-2995
作者机构：
[欧阳翌国] 湖南中医药高等专科学校;[邓常清; 唐映红; 黄小平; 丁煌] 湖南中医药大学
关键词：
黄芪甲苷;三七的有效成分;脑缺血再灌注;细胞凋亡
摘要：
目的：从细胞凋亡角度探讨黄芪和三七有效成分配伍抗脑缺血再灌注损伤的作用机制。方法将C57 BL／6小鼠随机分为：假手术组、模型组、黄芪甲苷（ ASTⅣ）组、人参皂苷Rg1（ Rg1）组、人参皂苷Rb1（ Rb1）组、三七皂苷R1（ R1）组、四种有效成分配伍组、ASTⅣ＋Rg1组、AST Ⅳ＋Rb1组、AST Ⅳ＋R1组、阳性对照药依达拉奉组，给药3 d后，夹闭双侧颈总动脉造成脑缺血再灌注模型，再灌注24 h后， TUNEL法检测神经细胞凋亡，计算凋亡率，western-blot法测定脑组织caspase-3蛋白表达。结果缺血再灌注后神经细胞凋亡率升高，caspase-3表达上调，各给药组均能降低神经细胞的凋亡率和caspase-3的表达。 ASTⅣ＋Rg1与AST Ⅳ＋R1降低凋亡率和caspase-3表达的效应分别大于各药物单用。四种有效成分配伍组降低凋亡率的效应大于四种有效成分单用及AST Ⅳ＋Rb1，抑制caspase-3蛋白表达的效应大于各有效成分单用及AST Ⅳ＋Rb1、ASTⅣ＋R1。结论黄芪甲苷与三七的主要有效成分配伍能增强对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的抑制作用， ASTⅣ＋Rg1、ASTⅣ＋R1以及四种有效成分配伍对细胞凋亡的抑制作用增强。
语种：
中文
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黄芪甲苷与三七有效成分配伍对小鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和内质网应激的影响
作者：
黄小平;欧阳国;丁煌;邓常清
（ ;唐映红
期刊：
中草药 ,2015年46(15):2257-2264 ISSN：0253-2670
通讯作者：
Deng, C.-Q.
作者机构：
[邓常清; 欧阳国; 唐映红; 丁煌; 黄小平] Molecular Pathology Laboratory, Key Laboratory of Hunan Province for Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Cardio-Cerebral Diseases, Key Laboratory of Hunan Universities for Cell Biology and Molecular Techniques, Changsha, 410208, China
通讯机构：
[Deng, C.-Q.] M;Molecular Pathology Laboratory, Key Laboratory of Hunan Province for Prevention and Treatment of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine on Cardio-Cerebral Diseases, Key Laboratory of Hunan Universities for Cell Biology and Molecular Techniques, Changsha, China
关键词：
黄芪甲苷;人参皂苷Rg_1;人参皂苷Rb_1;三七皂苷R_1;配伍;脑缺血再灌注;神经细胞凋亡;内质网应激
摘要：
从内质网应激角度探讨黄芪甲苷和三七主要有效成分配伍对小鼠脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的影响和作用机制。方法将C57BL/6小鼠随机分为假手术组、模型组、黄芪甲苷(AST IV,40 mg/kg)组、人参皂苷Rg_1(Rg_1,50 mg/kg))组、人参皂苷Rb_1(Rb_1,40 mg/kg)组、三七皂苷R_1(R_1,10 mg/kg)组、4种有效成分配伍(AST IV+Rg_1+Rb_1+R_1)组、 AST IV+Rg_1组、AST IV+Rb_1组、AST IV+R_1组及阳性对照依达拉奉组。各组小鼠预先给药3 d后,夹闭双侧颈总动脉造成脑缺血再灌注模型,再灌注24 h后,TUNEL法检测海马CA1区神经细胞凋亡,计算凋亡率;Western-blotting法测定脑组织半胱氨酸天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)、葡萄糖调节蛋白78(GRP78)、Caspase-12和磷酸化的c-jun氨基末端激酶1/2 (p-JNK1/2)蛋白表达。结果脑缺血20 min再灌注24 h后,小鼠海马CA1区神经细胞凋亡率和Caspase-3蛋白表达量增加。各给药组均能降低海马CA1区神经细胞凋亡率,抑制Caspase-3蛋白的表达。且AST IV+Rg_1与AST IV+R_1降低凋亡率和Caspase-3蛋白表达的效应分别强于各有效成分单用;4种有效成分配伍降低细胞凋亡率的效应强于各有效成分单用及AST IV+ Rb_1,抑制Caspase-3蛋白表达的效应强于各有效成分单用及AST IV+Rb_1、AST IV+R_1。脑缺血再灌注后,小鼠脑组织GRP78和Caspase-12、p-JNK1/2蛋白表达增多,AST IV、Rg_1、R_1及各配伍组均能进一步上调脑组织GRP78蛋白表达,且各有效成分配伍的效应分别强于各有效成分单用,4种有效成分配伍的效应强于AST IV+Rb_1及AST IV+R_1。R_1、4种有效成分配伍、 AST IV+Rg_1、AST IV+R_1均能降低Caspase-12蛋白的表达,4种有效成分配伍的效应强于各有效成分单用及AST IV+Rb_1。 AST IV、Rg_1、4种有效成分配伍、AST IV+Rg_1、AST IV+Rb_1组脑组织p-JNK1/2蛋白表达显著减少,4种有效成分配伍下调p-JNK1/2的效应强于各有效成分单用及AST IV+Rg_1、AST IV+R_1。结论黄芪甲苷与三七的主要有效成分配伍能增强对脑缺血再灌注后神经细胞凋亡的抑制作用,其机制与通过不同环节减轻内质网应激有关。AST IV+Rb_1可能主要作用于JNK通路, AST IV+R_1可能主要作用于Caspase-12通路,而4种有效成分配伍和AST IV+Rg_1均能作用于Caspase-12和JNK通路。
语种：
中文
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